浙江大学学报（医学版）
浙江大學學報（醫學版）
절강대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY MEDICAL SCIENCES
2013年
2期
141-148
,共8页
楼宏强%葛玉梅%张金良%严杰%赵金方
樓宏彊%葛玉梅%張金良%嚴傑%趙金方
루굉강%갈옥매%장금량%엄걸%조금방
弯曲杆菌,空肠/致病力%小鼠,基因敲除%鞭毛%聚合酶链反应%印迹法,蛋白质%鞭毛马达开关蛋白%运动力%趋化%定植
彎麯桿菌,空腸/緻病力%小鼠,基因敲除%鞭毛%聚閤酶鏈反應%印跡法,蛋白質%鞭毛馬達開關蛋白%運動力%趨化%定植
만곡간균,공장/치병력%소서,기인고제%편모%취합매련반응%인적법,단백질%편모마체개관단백%운동력%추화%정식
目的:构建空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)鞭毛马达开关蛋白FliY编码基因(fliY)敲除突变株,了解FliY蛋白控制细菌鞭毛运动的作用及其与细菌趋化和定植的关系.方法:采用pBluescript-Ⅱ-SK质粒构建用于敲除空肠弯曲菌NCTC11168株fliy基因的自杀质粒.根据同源交换原理,利用自杀质粒构建空肠弯曲菌fliY基因敲除突变株(fliY-).采用PCR、PCR产物测序与Western Blot,对fliY-突变株进行鉴定.采用体外菌落迁徙试验、细菌趋化试验以及小鼠空肠定植试验,检测fliY-突变株趋化和定植能力.结果:fliY-突变株生长曲线与野生株相似,但PCR与测序及Western Blot结果显示,fliY-突变株中fliY基因已被敲除.与野生株比较,fliY-突变株半固体平板上菌落明显较小(P＜0.05),对脱氧胆酸钠和牛胆汁趋化能力显著下降(P＜0.05),在感染小鼠空肠组织标本中的细菌数(CFU)也明显减少(P＜0.05).结论:空肠弯曲菌fliY基因功能与调控鞭毛运动作用有关,从而对细菌趋化和定植过程产生重大影响.
目的:構建空腸彎麯菌(Campylobacter jejuni)鞭毛馬達開關蛋白FliY編碼基因(fliY)敲除突變株,瞭解FliY蛋白控製細菌鞭毛運動的作用及其與細菌趨化和定植的關繫.方法:採用pBluescript-Ⅱ-SK質粒構建用于敲除空腸彎麯菌NCTC11168株fliy基因的自殺質粒.根據同源交換原理,利用自殺質粒構建空腸彎麯菌fliY基因敲除突變株(fliY-).採用PCR、PCR產物測序與Western Blot,對fliY-突變株進行鑒定.採用體外菌落遷徙試驗、細菌趨化試驗以及小鼠空腸定植試驗,檢測fliY-突變株趨化和定植能力.結果:fliY-突變株生長麯線與野生株相似,但PCR與測序及Western Blot結果顯示,fliY-突變株中fliY基因已被敲除.與野生株比較,fliY-突變株半固體平闆上菌落明顯較小(P＜0.05),對脫氧膽痠鈉和牛膽汁趨化能力顯著下降(P＜0.05),在感染小鼠空腸組織標本中的細菌數(CFU)也明顯減少(P＜0.05).結論:空腸彎麯菌fliY基因功能與調控鞭毛運動作用有關,從而對細菌趨化和定植過程產生重大影響.
목적:구건공장만곡균(Campylobacter jejuni)편모마체개관단백FliY편마기인(fliY)고제돌변주,료해FliY단백공제세균편모운동적작용급기여세균추화화정식적관계.방법:채용pBluescript-Ⅱ-SK질립구건용우고제공장만곡균NCTC11168주fliy기인적자살질립.근거동원교환원리,이용자살질립구건공장만곡균fliY기인고제돌변주(fliY-).채용PCR、PCR산물측서여Western Blot,대fliY-돌변주진행감정.채용체외균락천사시험、세균추화시험이급소서공장정식시험,검측fliY-돌변주추화화정식능력.결과:fliY-돌변주생장곡선여야생주상사,단PCR여측서급Western Blot결과현시,fliY-돌변주중fliY기인이피고제.여야생주비교,fliY-돌변주반고체평판상균락명현교소(P＜0.05),대탈양담산납화우담즙추화능력현저하강(P＜0.05),재감염소서공장조직표본중적세균수(CFU)야명현감소(P＜0.05).결론:공장만곡균fliY기인공능여조공편모운동작용유관,종이대세균추화화정식과정산생중대영향.
