江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
2期
365-369
,共5页
林蕾%袁海霞%田敬%郭婧%刘晓宁%孙红霞%余旭平
林蕾%袁海霞%田敬%郭婧%劉曉寧%孫紅霞%餘旭平
림뢰%원해하%전경%곽청%류효저%손홍하%여욱평
鹅圆环病毒%竞争PCR%检测方法
鵝圓環病毒%競爭PCR%檢測方法
아원배병독%경쟁PCR%검측방법
建立了基层临床定量检测鹅圆环病毒DNA的竞争PCR方法.以含有鹅圆环病毒(GoCV)全长基因组的pMDT-GoCV-yk01质粒为模板,PCR扩增出长度为625 bp的片段,克隆到pGEM-T Easy载体,获得目标模板,命名为pGoCV625-T;同时,构建与目标模板DNA有相同引物结合区、扩增片段长度为300 bp的竞争模板,克隆于pMD 18-T,获得竞争模板,命名为pGoCV300-T.用定量竞争模板pGoCV300-T与系列倍比稀释的定量目标模板pGoCV625-T进行竞争PCR扩增,利用二者PCR产物的荧光强度(IOD)比值与目标模板浓度对数值间的关联性建立标准竞争曲线,推算出直线回归方程,建立GoCV竞争PCR方法.结果表明,竞争模板与目标模板共扩增的最低检测限为1.0μl1.0×104拷贝.初步应用试验结果表明,该方法可定量检测GoCV阳性鹅法氏囊组织中的GoCV DNA.
建立瞭基層臨床定量檢測鵝圓環病毒DNA的競爭PCR方法.以含有鵝圓環病毒(GoCV)全長基因組的pMDT-GoCV-yk01質粒為模闆,PCR擴增齣長度為625 bp的片段,剋隆到pGEM-T Easy載體,穫得目標模闆,命名為pGoCV625-T;同時,構建與目標模闆DNA有相同引物結閤區、擴增片段長度為300 bp的競爭模闆,剋隆于pMD 18-T,穫得競爭模闆,命名為pGoCV300-T.用定量競爭模闆pGoCV300-T與繫列倍比稀釋的定量目標模闆pGoCV625-T進行競爭PCR擴增,利用二者PCR產物的熒光彊度(IOD)比值與目標模闆濃度對數值間的關聯性建立標準競爭麯線,推算齣直線迴歸方程,建立GoCV競爭PCR方法.結果錶明,競爭模闆與目標模闆共擴增的最低檢測限為1.0μl1.0×104拷貝.初步應用試驗結果錶明,該方法可定量檢測GoCV暘性鵝法氏囊組織中的GoCV DNA.
건립료기층림상정량검측아원배병독DNA적경쟁PCR방법.이함유아원배병독(GoCV)전장기인조적pMDT-GoCV-yk01질립위모판,PCR확증출장도위625 bp적편단,극륭도pGEM-T Easy재체,획득목표모판,명명위pGoCV625-T;동시,구건여목표모판DNA유상동인물결합구、확증편단장도위300 bp적경쟁모판,극륭우pMD 18-T,획득경쟁모판,명명위pGoCV300-T.용정량경쟁모판pGoCV300-T여계렬배비희석적정량목표모판pGoCV625-T진행경쟁PCR확증,이용이자PCR산물적형광강도(IOD)비치여목표모판농도대수치간적관련성건립표준경쟁곡선,추산출직선회귀방정,건립GoCV경쟁PCR방법.결과표명,경쟁모판여목표모판공확증적최저검측한위1.0μl1.0×104고패.초보응용시험결과표명,해방법가정량검측GoCV양성아법씨낭조직중적GoCV DNA.
