江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
2期
341-345
,共5页
李文良%毛立%张纹纹%杨蕾蕾%王小敏%江杰元
李文良%毛立%張紋紋%楊蕾蕾%王小敏%江傑元
리문량%모립%장문문%양뢰뢰%왕소민%강걸원
猪瘟病毒%E2蛋白%糖基化%杆状病毒表达系统
豬瘟病毒%E2蛋白%糖基化%桿狀病毒錶達繫統
저온병독%E2단백%당기화%간상병독표체계통
为获得糖基化的重组猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白,通过PCR扩增出去除C端跨膜区的猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV) E2蛋白基因,前面包含糖基化信号肽,末端引入StrepⅡ标签序列,将其克隆到Bac-to-Bac杆状病毒表达系统pFastBacTM HT B载体中,筛选获得阳性重组质粒pF-ge2,转化至含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态大肠杆菌中,经蓝白菌落筛选和PCR鉴定,获得重组表达载体rBac-ge2.在脂质体介导下转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rAc-gE2.Western-blot试验结果表明,重组蛋白得到正确表达,具有良好的抗原性；用糖苷酶PNGaseF处理后重组蛋白分子量减小到40 000,证明重组蛋白为糖基化蛋白.这为进一步研究E2蛋白的功能及CSFV新型亚单位疫苗的开发奠定了基础.
為穫得糖基化的重組豬瘟病毒(CSFV)E2蛋白,通過PCR擴增齣去除C耑跨膜區的豬瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV) E2蛋白基因,前麵包含糖基化信號肽,末耑引入StrepⅡ標籤序列,將其剋隆到Bac-to-Bac桿狀病毒錶達繫統pFastBacTM HT B載體中,篩選穫得暘性重組質粒pF-ge2,轉化至含有桿狀病毒穿梭載體的DH10Bac感受態大腸桿菌中,經藍白菌落篩選和PCR鑒定,穫得重組錶達載體rBac-ge2.在脂質體介導下轉染對數生長期的Sf9昆蟲細胞,穫得重組桿狀病毒rAc-gE2.Western-blot試驗結果錶明,重組蛋白得到正確錶達,具有良好的抗原性；用糖苷酶PNGaseF處理後重組蛋白分子量減小到40 000,證明重組蛋白為糖基化蛋白.這為進一步研究E2蛋白的功能及CSFV新型亞單位疫苗的開髮奠定瞭基礎.
위획득당기화적중조저온병독(CSFV)E2단백,통과PCR확증출거제C단과막구적저온토화약독역묘주(HCLV) E2단백기인,전면포함당기화신호태,말단인입StrepⅡ표첨서렬,장기극륭도Bac-to-Bac간상병독표체계통pFastBacTM HT B재체중,사선획득양성중조질립pF-ge2,전화지함유간상병독천사재체적DH10Bac감수태대장간균중,경람백균락사선화PCR감정,획득중조표체재체rBac-ge2.재지질체개도하전염대수생장기적Sf9곤충세포,획득중조간상병독rAc-gE2.Western-blot시험결과표명,중조단백득도정학표체,구유량호적항원성；용당감매PNGaseF처리후중조단백분자량감소도40 000,증명중조단백위당기화단백.저위진일보연구E2단백적공능급CSFV신형아단위역묘적개발전정료기출.
