CAJ | 학술논문

为了获得猪白细胞介素6(IL6)和α干扰素(IFNα)双重活性的融合蛋白,研究其作为免疫佐剂的可行性,利用IL6和IFNα基因的编码区序列以及原核表达载体pET32a序列,设计了带有限制性内切酶位点、Linker序列以及His标签的特异性引物扩增出猪IL6和IFNα的成熟肽基因序列,并分别与克隆载体pMD18连接后转化Escherichiα coli DH5α,提取质粒酶切并连接构建重组质粒pMD 18-IL6-IFNα.将该重组质粒和表达载体pET32a同时酶切并连接构建pET32-IL6-IFNα重组质粒,依次转化E.coli DH5α和E.coli Rosetta (DE3)感受态细胞,并经不同终浓度的IPTG以及不同时间的诱导表达.结果成功构建了IL6和IFNα的融合表达载体,SDS-PAGE检测pET32-IL6-IFNα融合蛋白在E.coli Rosetta (DE3)中得到了较高表达,且经1.00 mmol/L IPTG诱导7.0h后表达量最大,目的蛋白的相对分子量为44 960,与理论预期值一致.SDS-PAGE检测显示融合蛋白主要以不溶性的包涵体形式存在.
위료획득저백세포개소6(IL6)화α간우소(IFNα)쌍중활성적융합단백,연구기작위면역좌제적가행성,이용IL6화IFNα기인적편마구서렬이급원핵표체재체pET32a서렬,설계료대유한제성내절매위점、Linker서렬이급His표첨적특이성인물확증출저IL6화IFNα적성숙태기인서렬,병분별여극륭재체pMD18련접후전화Escherichiα coli DH5α,제취질립매절병련접구건중조질립pMD 18-IL6-IFNα.장해중조질립화표체재체pET32a동시매절병련접구건pET32-IL6-IFNα중조질립,의차전화E.coli DH5α화E.coli Rosetta (DE3)감수태세포,병경불동종농도적IPTG이급불동시간적유도표체.결과성공구건료IL6화IFNα적융합표체재체,SDS-PAGE검측pET32-IL6-IFNα융합단백재E.coli Rosetta (DE3)중득도료교고표체,차경1.00 mmol/L IPTG유도7.0h후표체량최대,목적단백적상대분자량위44 960,여이론예기치일치.SDS-PAGE검측현시융합단백주요이불용성적포함체형식존재.