CAJ | 학술논문

本研究旨在探讨低温保存对华通胶间充质干细胞(WJ-MSC)生物学特性的影响,为低温保存后WJ-MSC的临床应用及建立WJ-MSC库提供实验依据.通过脐带组织决培养制备WJ-MSC,将第5代WJ-MSC加入低温保护剂,-80℃冰箱降温,液氮保存.细胞复温后行培养和传代,低温保存组第1代(PPl)传代获得PP2-PP15.非低温保存组第6代为对照组第1代(CPl),传代获得CP2-CP15.比较对照组与低温保存组WJ-MSC的有核细胞回收率、台盼蓝拒染率、CCK-8活性、凋亡率、贴壁率、增殖指数、细胞表面抗原、细胞周期和向脂肪细胞、成骨细胞及神经元细胞诱导分化能力.结果表明,WJ-MSC经低温保存,有核细胞回收率为98.2％,台盼蓝拒染率为94.3％,CCK-8活性为91.4％,凋亡率为3.9％,贴壁率为92.6％；PP1较CP1增殖指数明显降低(P＜0.05),PP2-PP15与相应对照组增殖指数的差异均无统计学显著性；WJ-MSC高表达CD29、CD90、CD44、CD71、CD73、CD105、CD166和HLA-ABC,低表达CD34、CD45和HLA-DR,两组之间差异均无统计学显著性；增殖潜伏期和对数增殖期两组之间差异也无统计学意义；向脂肪细胞、成骨细胞和神经元细胞诱导分化后分别进行油红O、碱性磷酸酶(ALP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)染色,两组间阳性强度肉眼观察无明显差异；细胞内甘油三酯、ALP和NSE含量两组间也无显著差异.结论:WJ-MSC低温保存后少量细胞(＜10％)受到损伤,传代培养表明其生物学特性基本保持不变.
본연구지재탐토저온보존대화통효간충질간세포(WJ-MSC)생물학특성적영향,위저온보존후WJ-MSC적림상응용급건립WJ-MSC고제공실험의거.통과제대조직결배양제비WJ-MSC,장제5대WJ-MSC가입저온보호제,-80℃빙상강온,액담보존.세포복온후행배양화전대,저온보존조제1대(PPl)전대획득PP2-PP15.비저온보존조제6대위대조조제1대(CPl),전대획득CP2-CP15.비교대조조여저온보존조WJ-MSC적유핵세포회수솔、태반람거염솔、CCK-8활성、조망솔、첩벽솔、증식지수、세포표면항원、세포주기화향지방세포、성골세포급신경원세포유도분화능력.결과표명,WJ-MSC경저온보존,유핵세포회수솔위98.2％,태반람거염솔위94.3％,CCK-8활성위91.4％,조망솔위3.9％,첩벽솔위92.6％；PP1교CP1증식지수명현강저(P＜0.05),PP2-PP15여상응대조조증식지수적차이균무통계학현저성；WJ-MSC고표체CD29、CD90、CD44、CD71、CD73、CD105、CD166화HLA-ABC,저표체CD34、CD45화HLA-DR,량조지간차이균무통계학현저성；증식잠복기화대수증식기량조지간차이야무통계학의의；향지방세포、성골세포화신경원세포유도분화후분별진행유홍O、감성린산매(ALP)화신경원특이성희순화매(NSE)염색,량조간양성강도육안관찰무명현차이；세포내감유삼지、ALP화NSE함량량조간야무현저차이.결론:WJ-MSC저온보존후소량세포(＜10％)수도손상,전대배양표명기생물학특성기본보지불변.