中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2013年
1期
126-129
,共4页
凌婧%马珍妮%苏建%阮长耿
凌婧%馬珍妮%囌建%阮長耿
릉청%마진니%소건%원장경
ADAMTS13%pEGFP-N1栽体%载体构建%HeLa细胞
ADAMTS13%pEGFP-N1栽體%載體構建%HeLa細胞
ADAMTS13%pEGFP-N1재체%재체구건%HeLa세포
本研究旨在构建人血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13)的pEGFP-N1真核表达载体,为进一步研究ADAMTS13在细胞内合成及其分泌提供有力工具.通过PCR方法获取目的基因片段,并在目的基因两端加上限制性酶切位点.限制性内切酶酶切后,连接至pEGPF-N1真核表达载体.连接后获得质粒进行酶切鉴定及DNA测序验证,并转染HeLa细胞.通过荧光显微镜检测绿色荧光蛋白表达,Western blot方法鉴定所得蛋白.结果表明,酶切鉴定及DNA测序确认目的基因与载体正确连接,在荧光显微镜下观察到绿色荧光.Western blot显示,转染后HeLa细胞表达ADAMTS13蛋白.结论:成功构建了ADAMTS13-pEGFP-N1真核表达载体,为进一步研究ADAMTS13合成、分泌及其代谢的生理学机制提供了研究工具.
本研究旨在構建人血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13)的pEGFP-N1真覈錶達載體,為進一步研究ADAMTS13在細胞內閤成及其分泌提供有力工具.通過PCR方法穫取目的基因片段,併在目的基因兩耑加上限製性酶切位點.限製性內切酶酶切後,連接至pEGPF-N1真覈錶達載體.連接後穫得質粒進行酶切鑒定及DNA測序驗證,併轉染HeLa細胞.通過熒光顯微鏡檢測綠色熒光蛋白錶達,Western blot方法鑒定所得蛋白.結果錶明,酶切鑒定及DNA測序確認目的基因與載體正確連接,在熒光顯微鏡下觀察到綠色熒光.Western blot顯示,轉染後HeLa細胞錶達ADAMTS13蛋白.結論:成功構建瞭ADAMTS13-pEGFP-N1真覈錶達載體,為進一步研究ADAMTS13閤成、分泌及其代謝的生理學機製提供瞭研究工具.
본연구지재구건인혈관성혈우병인자렬해단백매(ADAMTS13)적pEGFP-N1진핵표체재체,위진일보연구ADAMTS13재세포내합성급기분비제공유력공구.통과PCR방법획취목적기인편단,병재목적기인량단가상한제성매절위점.한제성내절매매절후,련접지pEGPF-N1진핵표체재체.련접후획득질립진행매절감정급DNA측서험증,병전염HeLa세포.통과형광현미경검측록색형광단백표체,Western blot방법감정소득단백.결과표명,매절감정급DNA측서학인목적기인여재체정학련접,재형광현미경하관찰도록색형광.Western blot현시,전염후HeLa세포표체ADAMTS13단백.결론:성공구건료ADAMTS13-pEGFP-N1진핵표체재체,위진일보연구ADAMTS13합성、분비급기대사적생이학궤제제공료연구공구.
