CAJ | 학술논문

目的:比较Ⅰ、Ⅱ型胶原酶对新生大鼠颅盖骨的消化效果,选择效率较高的胶原酶,为日后从细胞水平研究中药治疗骨质疏松症的机制提供大量种子细胞.方法:新生24 h SD大鼠10只,雌雄不限,脱颈处死后取出颅盖骨,剪成约1 mm×1 mm的碎片,采用胰酶预消化15 min后将骨片按重量平分成两等份,随机分为Ⅰ型组、Ⅱ型组,分别用0.1％Ⅰ型、0.1％Ⅱ型胶原酶37℃消化1h×2次,所得细胞置于5％CO2培养箱中37 ℃恒温培养.原代细胞分别于培养0h、72 h时采用血球计数板进行计数,第2代细胞于培养48 h后采用NBT/BCIP染色液进行染色,并通过对硝基苯磷酸盐法(PNPP)进行ALP定量检测.结果:镜下观察所获得的细胞形态不规则,细胞计数显示Ⅰ型组细胞数量大于Ⅱ型组；ALP染色为阳性；PNPP法测得两组吸光度均值分别为0.427和0.262,Ⅰ型组显著高于Ⅱ型组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:两种胶原酶均适用于成骨细胞的原代消化,但采用Ⅰ型胶原酶获得的细胞数量更多、活性更好,可为日后骨质疏松症的机制研究提供优质的种子细胞.
목적:비교Ⅰ、Ⅱ형효원매대신생대서로개골적소화효과,선택효솔교고적효원매,위일후종세포수평연구중약치료골질소송증적궤제제공대량충자세포.방법:신생24 h SD대서10지,자웅불한,탈경처사후취출로개골,전성약1 mm×1 mm적쇄편,채용이매예소화15 min후장골편안중량평분성량등빈,수궤분위Ⅰ형조、Ⅱ형조,분별용0.1％Ⅰ형、0.1％Ⅱ형효원매37℃소화1h×2차,소득세포치우5％CO2배양상중37 ℃항온배양.원대세포분별우배양0h、72 h시채용혈구계수판진행계수,제2대세포우배양48 h후채용NBT/BCIP염색액진행염색,병통과대초기분린산염법(PNPP)진행ALP정량검측.결과:경하관찰소획득적세포형태불규칙,세포계수현시Ⅰ형조세포수량대우Ⅱ형조；ALP염색위양성；PNPP법측득량조흡광도균치분별위0.427화0.262,Ⅰ형조현저고우Ⅱ형조,차이구유통계학의의(P＜0.05).결론:량충효원매균괄용우성골세포적원대소화,단채용Ⅰ형효원매획득적세포수량경다、활성경호,가위일후골질소송증적궤제연구제공우질적충자세포.