中华实用儿科临床杂志
中華實用兒科臨床雜誌
중화실용인과림상잡지
Journal of Applied Clinical Pediatrics
2013年
9期
699-703
,共5页
王颖超%马丽娜%殷楚云%冯磊%魏永纬%盛光耀
王穎超%馬麗娜%慇楚雲%馮磊%魏永緯%盛光耀
왕영초%마려나%은초운%풍뢰%위영위%성광요
THP-1细胞%白血病干细胞%侧群细胞%阿糖胞苷
THP-1細胞%白血病榦細胞%側群細胞%阿糖胞苷
THP-1세포%백혈병간세포%측군세포%아당포감
THP-1 cell line%Leukemia stem cells%Side population cells%Ara-C
目的 探讨人急性单核细胞白血病细胞系THP-1中是否存在侧群(SP)细胞,鉴定其是否具有白血病干细胞(LSCs)的生物学特性,并研究从THP-1细胞系中富集SP细胞的方法.方法 THP-1细胞用Hoechst33342荧光染料染色后,分别应用荧光显微镜和流式细胞术(FCM)检测是否存在SP细胞及SP细胞的形态和比例.分选SP和非侧群(NSP)细胞,FCM检测其表面抗原表达及细胞周期；实时荧光定量PCR检测耐药基因ABCG2、ABCB1和凋亡基因Bcl-2、Bax在两亚群细胞中的表达差异.将THP-1细胞用不同水平阿糖胞苷(Ara-C)处理24h,染色后检测SP细胞比例的变化.结果 1.荧光显微镜观察到在THP-1细胞中存在拒染的SP细胞,形态与NSP细胞无明显区别.FCM检测结果显示,试验管SP细胞比例为(1.81±0.99)％,对照管可被维拉帕米完全拮抗.2.FCM分选SP细胞的纯度达到(96.71±0.90)％；SP细胞大部分处于静止期,Go/G1期细胞比例达(84.04 ±4.98)％,而NSP细胞则处于增殖期,S/G2/M期细胞比例为(56.38±1.48)％；CD34+、CD34+ CD38-细胞在SP亚群中的比例要高于NSP亚群(P ＜0.05)；SP细胞ABCG2及ABCB1表达水平显著高于NSP细胞(P均＜0.05).SP细胞Bcl-2表达水平(0.99±0.08)显著高于NSP细胞(0.29±0.13)(P＜0.05),而Bax表达值(0.68±0.05)与NSP细胞(0.85±0.09)表达水平差异无统计学意义(P＞0.05),但Bcl-2/Bax比值显著高于NSP细胞亚群(P＜0.05).3.经与Ara-C共培养24h后,SP细胞的比例显著提高,且随着Ara-C水平增大,SP细胞比例也越高.结论 人急性单核细胞白血病细胞系THP-1中存在少量SP细胞,较之NSP细胞更具有干细胞的生物学活性.与一定水平Ara-C共培养可有效富集THP-1细胞系中的SP细胞,可作为LSCs研究的切入点,对进一步研究白血病有重要意义.
目的 探討人急性單覈細胞白血病細胞繫THP-1中是否存在側群(SP)細胞,鑒定其是否具有白血病榦細胞(LSCs)的生物學特性,併研究從THP-1細胞繫中富集SP細胞的方法.方法 THP-1細胞用Hoechst33342熒光染料染色後,分彆應用熒光顯微鏡和流式細胞術(FCM)檢測是否存在SP細胞及SP細胞的形態和比例.分選SP和非側群(NSP)細胞,FCM檢測其錶麵抗原錶達及細胞週期；實時熒光定量PCR檢測耐藥基因ABCG2、ABCB1和凋亡基因Bcl-2、Bax在兩亞群細胞中的錶達差異.將THP-1細胞用不同水平阿糖胞苷(Ara-C)處理24h,染色後檢測SP細胞比例的變化.結果 1.熒光顯微鏡觀察到在THP-1細胞中存在拒染的SP細胞,形態與NSP細胞無明顯區彆.FCM檢測結果顯示,試驗管SP細胞比例為(1.81±0.99)％,對照管可被維拉帕米完全拮抗.2.FCM分選SP細胞的純度達到(96.71±0.90)％；SP細胞大部分處于靜止期,Go/G1期細胞比例達(84.04 ±4.98)％,而NSP細胞則處于增殖期,S/G2/M期細胞比例為(56.38±1.48)％；CD34+、CD34+ CD38-細胞在SP亞群中的比例要高于NSP亞群(P ＜0.05)；SP細胞ABCG2及ABCB1錶達水平顯著高于NSP細胞(P均＜0.05).SP細胞Bcl-2錶達水平(0.99±0.08)顯著高于NSP細胞(0.29±0.13)(P＜0.05),而Bax錶達值(0.68±0.05)與NSP細胞(0.85±0.09)錶達水平差異無統計學意義(P＞0.05),但Bcl-2/Bax比值顯著高于NSP細胞亞群(P＜0.05).3.經與Ara-C共培養24h後,SP細胞的比例顯著提高,且隨著Ara-C水平增大,SP細胞比例也越高.結論 人急性單覈細胞白血病細胞繫THP-1中存在少量SP細胞,較之NSP細胞更具有榦細胞的生物學活性.與一定水平Ara-C共培養可有效富集THP-1細胞繫中的SP細胞,可作為LSCs研究的切入點,對進一步研究白血病有重要意義.
목적 탐토인급성단핵세포백혈병세포계THP-1중시부존재측군(SP)세포,감정기시부구유백혈병간세포(LSCs)적생물학특성,병연구종THP-1세포계중부집SP세포적방법.방법 THP-1세포용Hoechst33342형광염료염색후,분별응용형광현미경화류식세포술(FCM)검측시부존재SP세포급SP세포적형태화비례.분선SP화비측군(NSP)세포,FCM검측기표면항원표체급세포주기；실시형광정량PCR검측내약기인ABCG2、ABCB1화조망기인Bcl-2、Bax재량아군세포중적표체차이.장THP-1세포용불동수평아당포감(Ara-C)처리24h,염색후검측SP세포비례적변화.결과 1.형광현미경관찰도재THP-1세포중존재거염적SP세포,형태여NSP세포무명현구별.FCM검측결과현시,시험관SP세포비례위(1.81±0.99)％,대조관가피유랍파미완전길항.2.FCM분선SP세포적순도체도(96.71±0.90)％；SP세포대부분처우정지기,Go/G1기세포비례체(84.04 ±4.98)％,이NSP세포칙처우증식기,S/G2/M기세포비례위(56.38±1.48)％；CD34+、CD34+ CD38-세포재SP아군중적비례요고우NSP아군(P ＜0.05)；SP세포ABCG2급ABCB1표체수평현저고우NSP세포(P균＜0.05).SP세포Bcl-2표체수평(0.99±0.08)현저고우NSP세포(0.29±0.13)(P＜0.05),이Bax표체치(0.68±0.05)여NSP세포(0.85±0.09)표체수평차이무통계학의의(P＞0.05),단Bcl-2/Bax비치현저고우NSP세포아군(P＜0.05).3.경여Ara-C공배양24h후,SP세포적비례현저제고,차수착Ara-C수평증대,SP세포비례야월고.결론 인급성단핵세포백혈병세포계THP-1중존재소량SP세포,교지NSP세포경구유간세포적생물학활성.여일정수평Ara-C공배양가유효부집THP-1세포계중적SP세포,가작위LSCs연구적절입점,대진일보연구백혈병유중요의의.
