CAJ | 학술논문

piggyBac(PB)转座子作为一种遗传工具被广泛应用于多个物种的转基因及插入突变研究,目前PB 转座子在牛中的相关研究还较少.为了获得PB 转座子在牛基因组中的整合位点,总结其转座特征,文章构建了PB[CMV-EGFP]和pcDNA-PBase 二元转座系统,利用细胞核电转技术共转染牛耳组织成纤维细胞,经G-418 筛选,获得了稳定转染EGFP 的转基因细胞系; 提取细胞基因组DNA,利用基因组步移技术扩增PB 转座子5′ Bac区插入位置的DNA 序列; 通过与牛基因组序列进行BLAST 比对,得到PB 转座子在牛基因组中的插入位点.文章共获得了8 个有效的整合位点,但仅有5 个位点定位到染色体1、2、11 和X 染色体上.序列分析表明:在牛基因组中,PB 转座子可特异性的插入到"TTAA"位置,并整合到基因间的非调控区; 分析整合位点"TTAA"相邻一侧的5 个碱基组成,发现PB 转座子5′端倾向于插入到GC(62.5%)碱基富集区.该研究表明,PB转座子可以在牛基因组中发生转座,获得的整合位点信息为利用PB 转座子在牛上开展遗传学研究提供了理论参考.
piggyBac(PB)전좌자작위일충유전공구피엄범응용우다개물충적전기인급삽입돌변연구,목전PB 전좌자재우중적상관연구환교소.위료획득PB 전좌자재우기인조중적정합위점,총결기전좌특정,문장구건료PB[CMV-EGFP]화pcDNA-PBase 이원전좌계통,이용세포핵전전기술공전염우이조직성섬유세포,경G-418 사선,획득료은정전염EGFP 적전기인세포계; 제취세포기인조DNA,이용기인조보이기술확증PB 전좌자5′ Bac구삽입위치적DNA 서렬; 통과여우기인조서렬진행BLAST 비대,득도PB 전좌자재우기인조중적삽입위점.문장공획득료8 개유효적정합위점,단부유5 개위점정위도염색체1、2、11 화X 염색체상.서렬분석표명:재우기인조중,PB 전좌자가특이성적삽입도"TTAA"위치,병정합도기인간적비조공구; 분석정합위점"TTAA"상린일측적5 개감기조성,발현PB 전좌자5′단경향우삽입도GC(62.5%)감기부집구.해연구표명,PB전좌자가이재우기인조중발생전좌,획득적정합위점신식위이용PB 전좌자재우상개전유전학연구제공료이론삼고.