中国癌症防治杂志
中國癌癥防治雜誌
중국암증방치잡지
CHINESE JOURNAL OF ONCOLOGY PREVENTION AND TREATMENT
2012年
4期
311-315
,共5页
范升龙%黄朋%涂镇波%李玲%张胜昌%陆巧巧%赵赫%周素芳
範升龍%黃朋%塗鎮波%李玲%張勝昌%陸巧巧%趙赫%週素芳
범승룡%황붕%도진파%리령%장성창%륙교교%조혁%주소방
肝肿瘤%CNN2%基因工程%表达%纯化
肝腫瘤%CNN2%基因工程%錶達%純化
간종류%CNN2%기인공정%표체%순화
目的 应用基因工程的方法构建H2-calponin(CNN2)基因工程表达质粒,体外表达、分离、纯化CNN2蛋白.方法 以PCR扩增CNN2cDNA序列,用基因工程技术将CNN2基因重组到表达质粒pCold Ⅲ中,转化BL21(DE3)pLysS宿主菌,以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamidegel electrophoresis,SDS-PAGE)检测目的蛋白的表达情况,优化表达条件,以较大体积培养基因工程菌,菌体经超声波破菌后,过Ni-NTA亲和柱纯化,Western-blot检测表达纯化的融合蛋白.结果 转化有pCold Ⅲ-CNN2重组质粒的基因工程菌能诱导表达CNN2蛋白,表达的目的蛋白占总菌体蛋白的35％；SDS-PAGE检测发现菌体上清液和沉淀物中均有目的蛋白片段,证实部分CNN2蛋白以可溶性形式表达；Western-blot检测结果提示表达纯化的蛋白能与抗CNN2抗体发生反应.结论 成功构建出表达可溶性CNN2蛋白的重组质粒,诱导表达的蛋白具有CNN2免疫原性.
目的 應用基因工程的方法構建H2-calponin(CNN2)基因工程錶達質粒,體外錶達、分離、純化CNN2蛋白.方法 以PCR擴增CNN2cDNA序列,用基因工程技術將CNN2基因重組到錶達質粒pCold Ⅲ中,轉化BL21(DE3)pLysS宿主菌,以SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamidegel electrophoresis,SDS-PAGE)檢測目的蛋白的錶達情況,優化錶達條件,以較大體積培養基因工程菌,菌體經超聲波破菌後,過Ni-NTA親和柱純化,Western-blot檢測錶達純化的融閤蛋白.結果 轉化有pCold Ⅲ-CNN2重組質粒的基因工程菌能誘導錶達CNN2蛋白,錶達的目的蛋白佔總菌體蛋白的35％；SDS-PAGE檢測髮現菌體上清液和沉澱物中均有目的蛋白片段,證實部分CNN2蛋白以可溶性形式錶達；Western-blot檢測結果提示錶達純化的蛋白能與抗CNN2抗體髮生反應.結論 成功構建齣錶達可溶性CNN2蛋白的重組質粒,誘導錶達的蛋白具有CNN2免疫原性.
목적 응용기인공정적방법구건H2-calponin(CNN2)기인공정표체질립,체외표체、분리、순화CNN2단백.방법 이PCR확증CNN2cDNA서렬,용기인공정기술장CNN2기인중조도표체질립pCold Ⅲ중,전화BL21(DE3)pLysS숙주균,이SDS-취병희선알응효전영(sodium dodecyl sulfate polyacrylamidegel electrophoresis,SDS-PAGE)검측목적단백적표체정황,우화표체조건,이교대체적배양기인공정균,균체경초성파파균후,과Ni-NTA친화주순화,Western-blot검측표체순화적융합단백.결과 전화유pCold Ⅲ-CNN2중조질립적기인공정균능유도표체CNN2단백,표체적목적단백점총균체단백적35％；SDS-PAGE검측발현균체상청액화침정물중균유목적단백편단,증실부분CNN2단백이가용성형식표체；Western-blot검측결과제시표체순화적단백능여항CNN2항체발생반응.결론 성공구건출표체가용성CNN2단백적중조질립,유도표체적단백구유CNN2면역원성.
