四川动物
四川動物
사천동물
SICHUAN JOURNAL OF ZOOLOGY
2012年
6期
880-883,886
,共5页
赵素君%王红宁%杨鑫%张安云%周英顺
趙素君%王紅寧%楊鑫%張安雲%週英順
조소군%왕홍저%양흠%장안운%주영순
禽传染性支气管炎病毒%鸡肺%酵母双杂交%cDNA文库%SMART技术
禽傳染性支氣管炎病毒%鷄肺%酵母雙雜交%cDNA文庫%SMART技術
금전염성지기관염병독%계폐%효모쌍잡교%cDNA문고%SMART기술
以1月龄SPF鸡肺为材料,用Trizol方法提取总RNA,并用mRNA纯化试剂盒纯化PolyA+mRNA,利用SMART技术合成双链cDNA(ds cDNA).合成的ds cDNA通过CHROMA SPINTM TE-400 Column进行纯化,纯化后的ds cDNA与线性pGADT7-Rec共转化酵母感受态细胞AH109中,以同源重组的方式,在酵母细胞内构建成鸡肺的cDNA文库.获得的文库容量为3.9 × 106 cfu,随机选取20个克隆进行PCR检测,插入片段大小集中在0.3～3.0 kb之间,平均插入片段约为1.4 kb左右,文库重组率为100％.结果表明该文库达到了高质量文库所应具备的条件,为酵母双杂交技术筛选与IBV-N相互作用的宿主细胞蛋白奠定基础.
以1月齡SPF鷄肺為材料,用Trizol方法提取總RNA,併用mRNA純化試劑盒純化PolyA+mRNA,利用SMART技術閤成雙鏈cDNA(ds cDNA).閤成的ds cDNA通過CHROMA SPINTM TE-400 Column進行純化,純化後的ds cDNA與線性pGADT7-Rec共轉化酵母感受態細胞AH109中,以同源重組的方式,在酵母細胞內構建成鷄肺的cDNA文庫.穫得的文庫容量為3.9 × 106 cfu,隨機選取20箇剋隆進行PCR檢測,插入片段大小集中在0.3～3.0 kb之間,平均插入片段約為1.4 kb左右,文庫重組率為100％.結果錶明該文庫達到瞭高質量文庫所應具備的條件,為酵母雙雜交技術篩選與IBV-N相互作用的宿主細胞蛋白奠定基礎.
이1월령SPF계폐위재료,용Trizol방법제취총RNA,병용mRNA순화시제합순화PolyA+mRNA,이용SMART기술합성쌍련cDNA(ds cDNA).합성적ds cDNA통과CHROMA SPINTM TE-400 Column진행순화,순화후적ds cDNA여선성pGADT7-Rec공전화효모감수태세포AH109중,이동원중조적방식,재효모세포내구건성계폐적cDNA문고.획득적문고용량위3.9 × 106 cfu,수궤선취20개극륭진행PCR검측,삽입편단대소집중재0.3～3.0 kb지간,평균삽입편단약위1.4 kb좌우,문고중조솔위100％.결과표명해문고체도료고질량문고소응구비적조건,위효모쌍잡교기술사선여IBV-N상호작용적숙주세포단백전정기출.
