渔业科学进展
漁業科學進展
어업과학진전
MARINE FISHERIES RESEARCH
2012年
6期
112-117
,共6页
朱旭%兰文升%刘荭%高隆英%杜鹃%陈孝煊
硃旭%蘭文升%劉葒%高隆英%杜鵑%陳孝煊
주욱%란문승%류홍%고륭영%두견%진효훤
传染性造血器官坏死症病毒%糖蛋白%原核表达%抗血清
傳染性造血器官壞死癥病毒%糖蛋白%原覈錶達%抗血清
전염성조혈기관배사증병독%당단백%원핵표체%항혈청
应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从传染性造血器官坏死病毒(Infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)感染的细胞悬液克隆病毒的糖蛋白基因,将其亚克隆至原核表达载体pCWori,转化到大肠杆菌DH 5α,通过发酵大肠杆菌制备病毒糖蛋白.经SDS-PAGE分析,诱导表达的重组蛋白主要以包涵体的形式存在,使用Ni-NTA亲和层析柱在变性条件下进行纯化并透析复性,最终得到了较高纯度的可溶性糖蛋白,分子量约为57 kDa.Western-blot分析结果显示,所表达的蛋白能够被IHNV病毒制备的兔抗IHNV血清识别.用复性后的蛋白免疫小鼠制备抗血清,ELISA显示抗体效价可达1∶64 000.经制备的抗血清可以作为一抗建立ELISA检测方法,用于检测细胞悬液的病毒粒子,将抗血清稀释到1∶16 000仍能与IHNV全病毒发生反应.本研究利用重组的IHNV糖蛋白成功制备了高效价的抗血清,并能够与IHNV全病毒发生特异性结合,为IHNV免疫学检测方法建立奠定了基础.
應用逆轉錄聚閤酶鏈式反應(RT-PCR)從傳染性造血器官壞死病毒(Infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)感染的細胞懸液剋隆病毒的糖蛋白基因,將其亞剋隆至原覈錶達載體pCWori,轉化到大腸桿菌DH 5α,通過髮酵大腸桿菌製備病毒糖蛋白.經SDS-PAGE分析,誘導錶達的重組蛋白主要以包涵體的形式存在,使用Ni-NTA親和層析柱在變性條件下進行純化併透析複性,最終得到瞭較高純度的可溶性糖蛋白,分子量約為57 kDa.Western-blot分析結果顯示,所錶達的蛋白能夠被IHNV病毒製備的兔抗IHNV血清識彆.用複性後的蛋白免疫小鼠製備抗血清,ELISA顯示抗體效價可達1∶64 000.經製備的抗血清可以作為一抗建立ELISA檢測方法,用于檢測細胞懸液的病毒粒子,將抗血清稀釋到1∶16 000仍能與IHNV全病毒髮生反應.本研究利用重組的IHNV糖蛋白成功製備瞭高效價的抗血清,併能夠與IHNV全病毒髮生特異性結閤,為IHNV免疫學檢測方法建立奠定瞭基礎.
응용역전록취합매련식반응(RT-PCR)종전염성조혈기관배사병독(Infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)감염적세포현액극륭병독적당단백기인,장기아극륭지원핵표체재체pCWori,전화도대장간균DH 5α,통과발효대장간균제비병독당단백.경SDS-PAGE분석,유도표체적중조단백주요이포함체적형식존재,사용Ni-NTA친화층석주재변성조건하진행순화병투석복성,최종득도료교고순도적가용성당단백,분자량약위57 kDa.Western-blot분석결과현시,소표체적단백능구피IHNV병독제비적토항IHNV혈청식별.용복성후적단백면역소서제비항혈청,ELISA현시항체효개가체1∶64 000.경제비적항혈청가이작위일항건립ELISA검측방법,용우검측세포현액적병독입자,장항혈청희석도1∶16 000잉능여IHNV전병독발생반응.본연구이용중조적IHNV당단백성공제비료고효개적항혈청,병능구여IHNV전병독발생특이성결합,위IHNV면역학검측방법건립전정료기출.
