生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2012年
11期
150-154
,共5页
鲜思美%韦洪才%尹强军%孔维祥%苏刚
鮮思美%韋洪纔%尹彊軍%孔維祥%囌剛
선사미%위홍재%윤강군%공유상%소강
鹅副黏病毒%逆转录环介导等温扩增技术%检测
鵝副黏病毒%逆轉錄環介導等溫擴增技術%檢測
아부점병독%역전록배개도등온확증기술%검측
参照GenBank中登录的鹅副黏病毒(gallinacean paramyxovirus,GPMV)序列(AY325797),针对GPMV的F基因保守区域设计了4条引物,通过优化反应条件,建立了检测GPMV的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),并进行了特异性试验、敏感性试验及临床样本检测.结果显示,建立的RT-LAMP方法对GPMV阳性样品扩增产物的电泳呈特征性梯状条带,而鸭瘟病毒(DPV)、鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)、鸭肝炎病毒(DHV)、鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer)、鸭源沙门氏菌(Salmonella anatamu)、鸡马立克病毒(MDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的扩增产物电泳后均无扩增条带.建立的RT-LAMP方法对GPMV的最低检出量为9.5 fg的cDNA模板,敏感性比常规RT-PCR方法高1 000倍.表明建立的RT-LAMP方法特异性强、敏感性高.对6份临床样本的检出率为100％ (6/6),与常规RT-PCR的符合率为100％.
參照GenBank中登錄的鵝副黏病毒(gallinacean paramyxovirus,GPMV)序列(AY325797),針對GPMV的F基因保守區域設計瞭4條引物,通過優化反應條件,建立瞭檢測GPMV的逆轉錄環介導等溫擴增技術(RT-LAMP),併進行瞭特異性試驗、敏感性試驗及臨床樣本檢測.結果顯示,建立的RT-LAMP方法對GPMV暘性樣品擴增產物的電泳呈特徵性梯狀條帶,而鴨瘟病毒(DPV)、鵝細小病毒(GPV)、番鴨細小病毒(MDPV)、鴨肝炎病毒(DHV)、鴨疫裏默氏桿菌(Riemerella anatipestifer)、鴨源沙門氏菌(Salmonella anatamu)、鷄馬立剋病毒(MDV)、鷄傳染性支氣管炎病毒(IBV)的擴增產物電泳後均無擴增條帶.建立的RT-LAMP方法對GPMV的最低檢齣量為9.5 fg的cDNA模闆,敏感性比常規RT-PCR方法高1 000倍.錶明建立的RT-LAMP方法特異性彊、敏感性高.對6份臨床樣本的檢齣率為100％ (6/6),與常規RT-PCR的符閤率為100％.
삼조GenBank중등록적아부점병독(gallinacean paramyxovirus,GPMV)서렬(AY325797),침대GPMV적F기인보수구역설계료4조인물,통과우화반응조건,건립료검측GPMV적역전록배개도등온확증기술(RT-LAMP),병진행료특이성시험、민감성시험급림상양본검측.결과현시,건립적RT-LAMP방법대GPMV양성양품확증산물적전영정특정성제상조대,이압온병독(DPV)、아세소병독(GPV)、번압세소병독(MDPV)、압간염병독(DHV)、압역리묵씨간균(Riemerella anatipestifer)、압원사문씨균(Salmonella anatamu)、계마립극병독(MDV)、계전염성지기관염병독(IBV)적확증산물전영후균무확증조대.건립적RT-LAMP방법대GPMV적최저검출량위9.5 fg적cDNA모판,민감성비상규RT-PCR방법고1 000배.표명건립적RT-LAMP방법특이성강、민감성고.대6빈림상양본적검출솔위100％ (6/6),여상규RT-PCR적부합솔위100％.
