生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2012年
11期
90-94
,共5页
陆俊佳%袁志刚%许淑茹%廖明%赖青鸟%畅荣妮%袁广之%侯伟%舒伟
陸俊佳%袁誌剛%許淑茹%廖明%賴青鳥%暢榮妮%袁廣之%侯偉%舒偉
륙준가%원지강%허숙여%료명%뢰청조%창영니%원엄지%후위%서위
TIE2%启动子%双荧光素酶活性检测
TIE2%啟動子%雙熒光素酶活性檢測
TIE2%계동자%쌍형광소매활성검측
克隆小鼠TIE2基因的启动子并分析其转录活性.设计并合成引物,以小鼠肝脏组织DNA为模板,巢式PCR扩增小鼠TIE2基因启动子区.将扩增获得的系列截短片段克隆入荧光素酶(Luc)报告基因表达载体pGL3-Basic中,构建系列启动子区转录活性报告质粒pGL3-TIE2-Luc.报告质粒与内参质粒共转染SVEC4-10、NIH3T3、HUVEC及NIT-1细胞系,48h后收获细胞检测双荧光素酶的表达情况.构建的pGL3-TIE2-Luc系列报告质粒经过酶切鉴定及DNA测序分析都显示正确；转染4种细胞系后进行双荧光素酶活性检测的结果表明,TIE2基因启动子区域(-2056-+1)具有较强的转录活性.成功构建小鼠TIE2基因启动子报告质粒,证实TIE2基因上游区域(-2056-+1)具有较强的启动子活性.
剋隆小鼠TIE2基因的啟動子併分析其轉錄活性.設計併閤成引物,以小鼠肝髒組織DNA為模闆,巢式PCR擴增小鼠TIE2基因啟動子區.將擴增穫得的繫列截短片段剋隆入熒光素酶(Luc)報告基因錶達載體pGL3-Basic中,構建繫列啟動子區轉錄活性報告質粒pGL3-TIE2-Luc.報告質粒與內參質粒共轉染SVEC4-10、NIH3T3、HUVEC及NIT-1細胞繫,48h後收穫細胞檢測雙熒光素酶的錶達情況.構建的pGL3-TIE2-Luc繫列報告質粒經過酶切鑒定及DNA測序分析都顯示正確；轉染4種細胞繫後進行雙熒光素酶活性檢測的結果錶明,TIE2基因啟動子區域(-2056-+1)具有較彊的轉錄活性.成功構建小鼠TIE2基因啟動子報告質粒,證實TIE2基因上遊區域(-2056-+1)具有較彊的啟動子活性.
극륭소서TIE2기인적계동자병분석기전록활성.설계병합성인물,이소서간장조직DNA위모판,소식PCR확증소서TIE2기인계동자구.장확증획득적계렬절단편단극륭입형광소매(Luc)보고기인표체재체pGL3-Basic중,구건계렬계동자구전록활성보고질립pGL3-TIE2-Luc.보고질립여내삼질립공전염SVEC4-10、NIH3T3、HUVEC급NIT-1세포계,48h후수획세포검측쌍형광소매적표체정황.구건적pGL3-TIE2-Luc계렬보고질립경과매절감정급DNA측서분석도현시정학；전염4충세포계후진행쌍형광소매활성검측적결과표명,TIE2기인계동자구역(-2056-+1)구유교강적전록활성.성공구건소서TIE2기인계동자보고질립,증실TIE2기인상유구역(-2056-+1)구유교강적계동자활성.
