CAJ | 학술논문

目的:探讨一种高效、稳定的从小鼠心肌组织中分离培养心肌微血管内皮细胞的方法并观察细胞的生物学特性.方法:以多聚赖氨酸对培养皿作预包被,采用Ⅱ型胶原酶消化、差速贴壁分离法,结合内皮细胞专用培养基,分离培养微血管内皮细胞并进行扩增.利用倒置显微镜观察细胞生长情况；台盼蓝法、绘制生长曲线和MTT法分别测定心肌微血管内皮细胞传代成活率、不同代生长及增殖特征；以DiI-ac-LDL和FITC-UEA-1荧光双标,结合CD31、vWF和CD34免疫荧光鉴定细胞表面特异性抗原；体外血管形成实验检测心肌微血管内皮细胞的功能.结果:酶消化、差速贴壁法分离培养2d后,细胞呈散在的、小簇状聚集性生长,4～5d迅速生长呈单层排列,细胞为梭形、三角形或多角形,7~8d后呈铺路石样即可传代；传代细胞经台盼蓝法检测成活率均为95％以上；第1、3代细胞生长曲线近似“S”形,MTT法显示第1、3代细胞在第2～4d吸光度变化较明显(P＜0.05)；随传代次数的增加,第5代细胞生长曲线近似平缓,吸光度无明显变化,细胞逐渐衰老；DiI-ac-LDL和FITC-UEA-1荧光双标阳性率为(89.2士3.5)％,相关特异性抗原CD31、vWF和CD34免疫荧光鉴定阳性率为(56.7±3.7)％、(78.5±2.6)％和(67.8±4.2)％；体外血管形成实验显示,6～12 h后出现明显的管腔结构.结论:以多聚赖氨酸作预包被,采用Ⅱ型胶原酶消化、差速贴壁法并结合内皮细胞专用培养基,可获得纯度较高的小鼠心肌微血管内皮细胞,为心脏疾病的研究提供种子细胞.
목적:탐토일충고효、은정적종소서심기조직중분리배양심기미혈관내피세포적방법병관찰세포적생물학특성.방법:이다취뢰안산대배양명작예포피,채용Ⅱ형효원매소화、차속첩벽분리법,결합내피세포전용배양기,분리배양미혈관내피세포병진행확증.이용도치현미경관찰세포생장정황；태반람법、회제생장곡선화MTT법분별측정심기미혈관내피세포전대성활솔、불동대생장급증식특정；이DiI-ac-LDL화FITC-UEA-1형광쌍표,결합CD31、vWF화CD34면역형광감정세포표면특이성항원；체외혈관형성실험검측심기미혈관내피세포적공능.결과:매소화、차속첩벽법분리배양2d후,세포정산재적、소족상취집성생장,4～5d신속생장정단층배렬,세포위사형、삼각형혹다각형,7~8d후정포로석양즉가전대；전대세포경태반람법검측성활솔균위95％이상；제1、3대세포생장곡선근사“S”형,MTT법현시제1、3대세포재제2～4d흡광도변화교명현(P＜0.05)；수전대차수적증가,제5대세포생장곡선근사평완,흡광도무명현변화,세포축점쇠로；DiI-ac-LDL화FITC-UEA-1형광쌍표양성솔위(89.2사3.5)％,상관특이성항원CD31、vWF화CD34면역형광감정양성솔위(56.7±3.7)％、(78.5±2.6)％화(67.8±4.2)％；체외혈관형성실험현시,6～12 h후출현명현적관강결구.결론:이다취뢰안산작예포피,채용Ⅱ형효원매소화、차속첩벽법병결합내피세포전용배양기,가획득순도교고적소서심기미혈관내피세포,위심장질병적연구제공충자세포.