河南农业大学学报
河南農業大學學報
하남농업대학학보
ACTA AGRICULTURAE UNIVERSITATIS HENANENSIS
2013年
1期
77-82
,共6页
暴元元%赵青君%徐婷婷%陈锐博%赵卫东%郑振宇%李春丽
暴元元%趙青君%徐婷婷%陳銳博%趙衛東%鄭振宇%李春麗
폭원원%조청군%서정정%진예박%조위동%정진우%리춘려
防御素%甜蛋白%基因合成%克隆表达%活性检测
防禦素%甜蛋白%基因閤成%剋隆錶達%活性檢測
방어소%첨단백%기인합성%극륭표체%활성검측
根据人β防御素3和植物甜蛋白des-pGlul-Brazzein的氨基酸序列,按照酵母密码子的偏爱性,合成了14段末端具有粘合位点的核苷酸序列,经连接、PCR扩增,使人β防御素3和植物甜蛋白des-pG lul-Brazzein的编码序列通过1段序列(含凝血酶切割位点)连接成为嵌合基因,将其插入到pPIC9K载体中,构建重组表达载体pPIC9K-hBD3-Bra.SalⅠ,BglⅡ单酶切后,分别电击转化到毕赤酵母GS115中,构建野生型和乙醇氧化酶缺陷型酵母工程菌株GS115-pPIC9K-hBD3-Bra.筛选鉴定后,以体积分数为0.5％的甲醇进行诱导,缺陷型工程菌株表达的目的蛋白约占上清蛋白的90％,纯度较高,野生型工程菌株表达的目的蛋白约占上清蛋白的57.8％.
根據人β防禦素3和植物甜蛋白des-pGlul-Brazzein的氨基痠序列,按照酵母密碼子的偏愛性,閤成瞭14段末耑具有粘閤位點的覈苷痠序列,經連接、PCR擴增,使人β防禦素3和植物甜蛋白des-pG lul-Brazzein的編碼序列通過1段序列(含凝血酶切割位點)連接成為嵌閤基因,將其插入到pPIC9K載體中,構建重組錶達載體pPIC9K-hBD3-Bra.SalⅠ,BglⅡ單酶切後,分彆電擊轉化到畢赤酵母GS115中,構建野生型和乙醇氧化酶缺陷型酵母工程菌株GS115-pPIC9K-hBD3-Bra.篩選鑒定後,以體積分數為0.5％的甲醇進行誘導,缺陷型工程菌株錶達的目的蛋白約佔上清蛋白的90％,純度較高,野生型工程菌株錶達的目的蛋白約佔上清蛋白的57.8％.
근거인β방어소3화식물첨단백des-pGlul-Brazzein적안기산서렬,안조효모밀마자적편애성,합성료14단말단구유점합위점적핵감산서렬,경련접、PCR확증,사인β방어소3화식물첨단백des-pG lul-Brazzein적편마서렬통과1단서렬(함응혈매절할위점)련접성위감합기인,장기삽입도pPIC9K재체중,구건중조표체재체pPIC9K-hBD3-Bra.SalⅠ,BglⅡ단매절후,분별전격전화도필적효모GS115중,구건야생형화을순양화매결함형효모공정균주GS115-pPIC9K-hBD3-Bra.사선감정후,이체적분수위0.5％적갑순진행유도,결함형공정균주표체적목적단백약점상청단백적90％,순도교고,야생형공정균주표체적목적단백약점상청단백적57.8％.
