中国中西医结合杂志
中國中西醫結閤雜誌
중국중서의결합잡지
CHINESE JOURNAL OF INTEGRATED TRADITIONAL AND WESTERN MEDICINE
2013年
5期
651-658
,共8页
杜标炎%郭玉荣%易华%谭宇蕙%吴映雅
杜標炎%郭玉榮%易華%譚宇蕙%吳映雅
두표염%곽옥영%역화%담우혜%오영아
恶性黑色素瘤%基因治疗%自杀基因%六味地黄丸%血清药理学%缝隙连接
噁性黑色素瘤%基因治療%自殺基因%六味地黃汍%血清藥理學%縫隙連接
악성흑색소류%기인치료%자살기인%륙미지황환%혈청약이학%봉극련접
目的 探讨六味地黄丸含药血清对HSV-tk/GCV自杀基因系统杀伤小鼠黑色素细胞瘤B16细胞增效作用的缝隙连接机制.方法 制备六味地黄丸含药血清(分别为2.5％、5.O％、10.0％六味血清)及10.0％对照血清.采用RT-PCR法检测六味地黄丸含药血清对B16细胞株的缝隙链接蛋白(Cx) 26和Cx43 mRNA的影响,Western blot法和间接免疫荧光法检测其对B16细胞Cx26和Cx43蛋白表达的影响;RT-PCR检测Cx26-309、Cx26-337、Cx26-367、Cx26-2098 SiRNA对Cx26的干扰效率,选用干扰效率最高的Cx26-2098 SiRNA干扰Cx26基因后观察六味地黄丸联合HSV-tk/GCV的旁观者效应;MTT法检测细胞间缝隙连接通讯功能(gap junctional intercellular communication,GJIC)抑制剂甘草次酸(GA)对六味地黄丸联合tk/GCV系统对B16细胞杀伤作用的影响,实验设为对照血清组,2.5％、5.O％、10.0％六味血清组(简称低、中、高剂量组)及对照血清联合GCV组,低、中、高剂量联合GCV组,低、中、高剂量联合GCV加GA组.GCV终浓度为20 mol/L,GA终浓度为50 mol/L.结果 六味地黄丸含药血清能提高B16细胞中Cx43 mRNA及蛋白的表达,且具有量效依赖关系;对Cx26 mRNA与蛋白的表达具有双向调节作用,低剂量时具有抑制作用而高剂量是能上调其表达;SiRNA干扰Cx26基因表达后,六味地黄丸联合自杀基因治疗的旁观者效应与没有干扰前比较无明显的变化;低、中、高剂量联合GCV组在GA阻断前细胞抑制率(48.75％、59.39％、69.28％)与阻断后细胞抑制率(29.14％、38.71％、58.13％)比较,显著降低,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 六味地黄丸含药血清对HSV-tk/GCV自杀基因系统杀伤恶性黑色素瘤B16细胞的增效作用与缝隙连接机制有关,可能是通过提高Cx26和Cx43等缝隙连接蛋白表达而达到协同增效作用.
目的 探討六味地黃汍含藥血清對HSV-tk/GCV自殺基因繫統殺傷小鼠黑色素細胞瘤B16細胞增效作用的縫隙連接機製.方法 製備六味地黃汍含藥血清(分彆為2.5％、5.O％、10.0％六味血清)及10.0％對照血清.採用RT-PCR法檢測六味地黃汍含藥血清對B16細胞株的縫隙鏈接蛋白(Cx) 26和Cx43 mRNA的影響,Western blot法和間接免疫熒光法檢測其對B16細胞Cx26和Cx43蛋白錶達的影響;RT-PCR檢測Cx26-309、Cx26-337、Cx26-367、Cx26-2098 SiRNA對Cx26的榦擾效率,選用榦擾效率最高的Cx26-2098 SiRNA榦擾Cx26基因後觀察六味地黃汍聯閤HSV-tk/GCV的徬觀者效應;MTT法檢測細胞間縫隙連接通訊功能(gap junctional intercellular communication,GJIC)抑製劑甘草次痠(GA)對六味地黃汍聯閤tk/GCV繫統對B16細胞殺傷作用的影響,實驗設為對照血清組,2.5％、5.O％、10.0％六味血清組(簡稱低、中、高劑量組)及對照血清聯閤GCV組,低、中、高劑量聯閤GCV組,低、中、高劑量聯閤GCV加GA組.GCV終濃度為20 mol/L,GA終濃度為50 mol/L.結果 六味地黃汍含藥血清能提高B16細胞中Cx43 mRNA及蛋白的錶達,且具有量效依賴關繫;對Cx26 mRNA與蛋白的錶達具有雙嚮調節作用,低劑量時具有抑製作用而高劑量是能上調其錶達;SiRNA榦擾Cx26基因錶達後,六味地黃汍聯閤自殺基因治療的徬觀者效應與沒有榦擾前比較無明顯的變化;低、中、高劑量聯閤GCV組在GA阻斷前細胞抑製率(48.75％、59.39％、69.28％)與阻斷後細胞抑製率(29.14％、38.71％、58.13％)比較,顯著降低,差異有統計學意義(P＜0.01).結論 六味地黃汍含藥血清對HSV-tk/GCV自殺基因繫統殺傷噁性黑色素瘤B16細胞的增效作用與縫隙連接機製有關,可能是通過提高Cx26和Cx43等縫隙連接蛋白錶達而達到協同增效作用.
목적 탐토륙미지황환함약혈청대HSV-tk/GCV자살기인계통살상소서흑색소세포류B16세포증효작용적봉극련접궤제.방법 제비륙미지황환함약혈청(분별위2.5％、5.O％、10.0％륙미혈청)급10.0％대조혈청.채용RT-PCR법검측륙미지황환함약혈청대B16세포주적봉극련접단백(Cx) 26화Cx43 mRNA적영향,Western blot법화간접면역형광법검측기대B16세포Cx26화Cx43단백표체적영향;RT-PCR검측Cx26-309、Cx26-337、Cx26-367、Cx26-2098 SiRNA대Cx26적간우효솔,선용간우효솔최고적Cx26-2098 SiRNA간우Cx26기인후관찰륙미지황환연합HSV-tk/GCV적방관자효응;MTT법검측세포간봉극련접통신공능(gap junctional intercellular communication,GJIC)억제제감초차산(GA)대륙미지황환연합tk/GCV계통대B16세포살상작용적영향,실험설위대조혈청조,2.5％、5.O％、10.0％륙미혈청조(간칭저、중、고제량조)급대조혈청연합GCV조,저、중、고제량연합GCV조,저、중、고제량연합GCV가GA조.GCV종농도위20 mol/L,GA종농도위50 mol/L.결과 륙미지황환함약혈청능제고B16세포중Cx43 mRNA급단백적표체,차구유량효의뢰관계;대Cx26 mRNA여단백적표체구유쌍향조절작용,저제량시구유억제작용이고제량시능상조기표체;SiRNA간우Cx26기인표체후,륙미지황환연합자살기인치료적방관자효응여몰유간우전비교무명현적변화;저、중、고제량연합GCV조재GA조단전세포억제솔(48.75％、59.39％、69.28％)여조단후세포억제솔(29.14％、38.71％、58.13％)비교,현저강저,차이유통계학의의(P＜0.01).결론 륙미지황환함약혈청대HSV-tk/GCV자살기인계통살상악성흑색소류B16세포적증효작용여봉극련접궤제유관,가능시통과제고Cx26화Cx43등봉극련접단백표체이체도협동증효작용.
