CAJ | 학술논문

P0蛋白是南瓜蚜传黄化病毒基因组编码的基因沉默抑制子.根据已克隆的CABYV P0蛋白基因序列,设计带酶切位点的特异性引物,PCR扩增用于构建RNAi表达载体的P0蛋白基因正反义片段.将正反义片段分别插入到含有内含子的中间载体pBSint上,得到重组的中间载体pBSint-P0-F-R.用Sal I和Sac I双酶切pBSintP0-F-R,将切下的包括内含子和正反义P0蛋白基因在内的片段定向克隆到植物表达载体pCambia1300上,得到含有发卡结构的RNAi表达载体pCambia-P0-F-R.通过农杆菌介导的方法将该表达载体转化本生烟,经PCR检测,得到4株阳性转基因植株.为设计出更广谱、特异有效的抗病毒策略及研究病毒蛋白的功能特性及其侵染机制提供实验材料.
P0단백시남과아전황화병독기인조편마적기인침묵억제자.근거이극륭적CABYV P0단백기인서렬,설계대매절위점적특이성인물,PCR확증용우구건RNAi표체재체적P0단백기인정반의편단.장정반의편단분별삽입도함유내함자적중간재체pBSint상,득도중조적중간재체pBSint-P0-F-R.용Sal I화Sac I쌍매절pBSintP0-F-R,장절하적포괄내함자화정반의P0단백기인재내적편단정향극륭도식물표체재체pCambia1300상,득도함유발잡결구적RNAi표체재체pCambia-P0-F-R.통과농간균개도적방법장해표체재체전화본생연,경PCR검측,득도4주양성전기인식주.위설계출경엄보、특이유효적항병독책략급연구병독단백적공능특성급기침염궤제제공실험재료.