温州医学院学报
溫州醫學院學報
온주의학원학보
JOURNAL OF WENZHOU MEDICAL COLLEGE
2012年
6期
521-525
,共5页
水通道蛋白7%重组腺病毒%3T3-L1细胞%大鼠
水通道蛋白7%重組腺病毒%3T3-L1細胞%大鼠
수통도단백7%중조선병독%3T3-L1세포%대서
目的:构建携带大鼠AQP7基因的腺病毒载体,并检测其在3T3-L1脂肪细胞中的表达.方法:采用RT-PCR方法,从大鼠脂肪组织中扩增克隆大鼠AQP7基因,插入到穿梭质粒中获得重组质粒pDC316-AQP7.PCR、酶切鉴定后,重组穿梭质粒和骨架质粒经脂质体2000转染293细胞出毒产生重组腺病毒.经PCR进行鉴定,转染293细胞扩增并纯化,半数组织培养感染剂量(TCID 50)方法测定腺病毒滴度.体外转染分化成熟的3T3-L1细胞,用Western blot方法检测AQP7的表达水平.结果:PCR、酶切及测序证实重组穿梭质粒构建正确.同时成功构建AQP7重组腺病毒,并制备出高滴度的病毒保存液,可以有效转染3T3-L1细胞.结论:成功构建了含大鼠AQP7基因的重组腺病毒载体且其可以在3T3-L1细胞中有效表达,为今后更好地研究AQP7在肥胖发生发展过程中的调控机制奠定了基础.
目的:構建攜帶大鼠AQP7基因的腺病毒載體,併檢測其在3T3-L1脂肪細胞中的錶達.方法:採用RT-PCR方法,從大鼠脂肪組織中擴增剋隆大鼠AQP7基因,插入到穿梭質粒中穫得重組質粒pDC316-AQP7.PCR、酶切鑒定後,重組穿梭質粒和骨架質粒經脂質體2000轉染293細胞齣毒產生重組腺病毒.經PCR進行鑒定,轉染293細胞擴增併純化,半數組織培養感染劑量(TCID 50)方法測定腺病毒滴度.體外轉染分化成熟的3T3-L1細胞,用Western blot方法檢測AQP7的錶達水平.結果:PCR、酶切及測序證實重組穿梭質粒構建正確.同時成功構建AQP7重組腺病毒,併製備齣高滴度的病毒保存液,可以有效轉染3T3-L1細胞.結論:成功構建瞭含大鼠AQP7基因的重組腺病毒載體且其可以在3T3-L1細胞中有效錶達,為今後更好地研究AQP7在肥胖髮生髮展過程中的調控機製奠定瞭基礎.
목적:구건휴대대서AQP7기인적선병독재체,병검측기재3T3-L1지방세포중적표체.방법:채용RT-PCR방법,종대서지방조직중확증극륭대서AQP7기인,삽입도천사질립중획득중조질립pDC316-AQP7.PCR、매절감정후,중조천사질립화골가질립경지질체2000전염293세포출독산생중조선병독.경PCR진행감정,전염293세포확증병순화,반수조직배양감염제량(TCID 50)방법측정선병독적도.체외전염분화성숙적3T3-L1세포,용Western blot방법검측AQP7적표체수평.결과:PCR、매절급측서증실중조천사질립구건정학.동시성공구건AQP7중조선병독,병제비출고적도적병독보존액,가이유효전염3T3-L1세포.결론:성공구건료함대서AQP7기인적중조선병독재체차기가이재3T3-L1세포중유효표체,위금후경호지연구AQP7재비반발생발전과정중적조공궤제전정료기출.
