中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2012年
11期
1003-1006
,共4页
周一军%李瑷%宋雨凌%李妍%周慧
週一軍%李璦%宋雨凌%李妍%週慧
주일군%리애%송우릉%리연%주혜
C蛋白耦联受体40%反义RNA%游离脂肪酸%胰岛素分泌%细胞内钙
C蛋白耦聯受體40%反義RNA%遊離脂肪痠%胰島素分泌%細胞內鈣
C단백우련수체40%반의RNA%유리지방산%이도소분비%세포내개
目的 应用反义RNA技术特异性下调胰岛β细胞G蛋白耦联受体(GPR40)的表达,观察其对胰岛β细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)及胰岛素分泌的影响.方法 体外分离SD大鼠胰岛β细胞,将GPR40反义RNA表达载体pcDNA3.1(+)-GPR40(-)用脂质体体外瞬时转染胰岛细胞,Western blot检测GPR40蛋白的表达,将1.0 mmol/L游离脂肪酸(软脂酸∶油酸=2∶1)与胰岛细胞共培养10,30,60 min,进行高葡萄糖刺激胰岛素释放试验,利用荧光探针Fura-2/AM,测定胰岛细胞[Ca2+]i变化,放射免疫法检测培养液中胰岛素浓度变化.结果 与对照组和空白质粒转染组比较,GPR40反义RNA可显著降低细胞GPR40蛋白的表达水平(P＜0.05),在各作用时间点,GPR40反义RNA转染组[Ca2+]i显著低于对照组(P＜0.05),同时GPR40反义RNA转染组胰岛细胞的胰岛素分泌明显低于对照组(P＜0.05).结论 GPR40介导游离脂肪酸刺激β细胞内[Ca2+]i升高和胰岛素分泌.
目的 應用反義RNA技術特異性下調胰島β細胞G蛋白耦聯受體(GPR40)的錶達,觀察其對胰島β細胞內Ca2+濃度([Ca2+]i)及胰島素分泌的影響.方法 體外分離SD大鼠胰島β細胞,將GPR40反義RNA錶達載體pcDNA3.1(+)-GPR40(-)用脂質體體外瞬時轉染胰島細胞,Western blot檢測GPR40蛋白的錶達,將1.0 mmol/L遊離脂肪痠(軟脂痠∶油痠=2∶1)與胰島細胞共培養10,30,60 min,進行高葡萄糖刺激胰島素釋放試驗,利用熒光探針Fura-2/AM,測定胰島細胞[Ca2+]i變化,放射免疫法檢測培養液中胰島素濃度變化.結果 與對照組和空白質粒轉染組比較,GPR40反義RNA可顯著降低細胞GPR40蛋白的錶達水平(P＜0.05),在各作用時間點,GPR40反義RNA轉染組[Ca2+]i顯著低于對照組(P＜0.05),同時GPR40反義RNA轉染組胰島細胞的胰島素分泌明顯低于對照組(P＜0.05).結論 GPR40介導遊離脂肪痠刺激β細胞內[Ca2+]i升高和胰島素分泌.
목적 응용반의RNA기술특이성하조이도β세포G단백우련수체(GPR40)적표체,관찰기대이도β세포내Ca2+농도([Ca2+]i)급이도소분비적영향.방법 체외분리SD대서이도β세포,장GPR40반의RNA표체재체pcDNA3.1(+)-GPR40(-)용지질체체외순시전염이도세포,Western blot검측GPR40단백적표체,장1.0 mmol/L유리지방산(연지산∶유산=2∶1)여이도세포공배양10,30,60 min,진행고포도당자격이도소석방시험,이용형광탐침Fura-2/AM,측정이도세포[Ca2+]i변화,방사면역법검측배양액중이도소농도변화.결과 여대조조화공백질립전염조비교,GPR40반의RNA가현저강저세포GPR40단백적표체수평(P＜0.05),재각작용시간점,GPR40반의RNA전염조[Ca2+]i현저저우대조조(P＜0.05),동시GPR40반의RNA전염조이도세포적이도소분비명현저우대조조(P＜0.05).결론 GPR40개도유리지방산자격β세포내[Ca2+]i승고화이도소분비.
