中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2012年
11期
977-980
,共4页
杨雪%勾文峰%丁蕾%肖丽君%高野康雄%郑华川
楊雪%勾文峰%丁蕾%肖麗君%高野康雄%鄭華川
양설%구문봉%정뢰%초려군%고야강웅%정화천
原位杂交%原位PCR%核酸%病理形态学检测
原位雜交%原位PCR%覈痠%病理形態學檢測
원위잡교%원위PCR%핵산%병리형태학검측
目的 建立地高辛标记原位杂交(ISH)和原位PCR(ISP)方法,探讨其在病理形态学检测中的应用.方法 以细胞cDNA或质粒DNA为模板制备地高辛探针,ISH检测肺癌、胃癌或结直肠癌切片上JCV T抗原DNA、beclin 1和SERCA3 mRNA表达水平.在肺癌和胃癌切片上扩增地高辛标记的JCV T抗原DNA.杂交或标记后,进行抗地高辛碱性磷酸酶反应并行NBT/BCIP或Fuchsin显色.结果 PCR扩增获得高纯度地高辛标记DNA探针,甲酰胺杂交液杂交显示JCV T抗原存在于JCI细胞的细胞核中,beclin 1和SERCA3 mRNA阳性信号见于结肠癌和癌旁黏膜上皮细胞质中.ISP扩增了地高辛标记的JCV T抗原DNA,显色后发现JCV T抗原主要定位在JCI细胞、肺泡上皮细胞和肺癌细胞核、胃癌及癌旁黏膜细胞核中.NBT/BCIP显色比Fuchsin显色更为敏感,甲基绿复染使得上述2种显色更加清晰.结论 地高辛标记的ISH和ISP操作简便,敏感度高,NBT/BCIP显色和甲基绿复染图像美观.
目的 建立地高辛標記原位雜交(ISH)和原位PCR(ISP)方法,探討其在病理形態學檢測中的應用.方法 以細胞cDNA或質粒DNA為模闆製備地高辛探針,ISH檢測肺癌、胃癌或結直腸癌切片上JCV T抗原DNA、beclin 1和SERCA3 mRNA錶達水平.在肺癌和胃癌切片上擴增地高辛標記的JCV T抗原DNA.雜交或標記後,進行抗地高辛堿性燐痠酶反應併行NBT/BCIP或Fuchsin顯色.結果 PCR擴增穫得高純度地高辛標記DNA探針,甲酰胺雜交液雜交顯示JCV T抗原存在于JCI細胞的細胞覈中,beclin 1和SERCA3 mRNA暘性信號見于結腸癌和癌徬黏膜上皮細胞質中.ISP擴增瞭地高辛標記的JCV T抗原DNA,顯色後髮現JCV T抗原主要定位在JCI細胞、肺泡上皮細胞和肺癌細胞覈、胃癌及癌徬黏膜細胞覈中.NBT/BCIP顯色比Fuchsin顯色更為敏感,甲基綠複染使得上述2種顯色更加清晰.結論 地高辛標記的ISH和ISP操作簡便,敏感度高,NBT/BCIP顯色和甲基綠複染圖像美觀.
목적 건입지고신표기원위잡교(ISH)화원위PCR(ISP)방법,탐토기재병리형태학검측중적응용.방법 이세포cDNA혹질립DNA위모판제비지고신탐침,ISH검측폐암、위암혹결직장암절편상JCV T항원DNA、beclin 1화SERCA3 mRNA표체수평.재폐암화위암절편상확증지고신표기적JCV T항원DNA.잡교혹표기후,진행항지고신감성린산매반응병행NBT/BCIP혹Fuchsin현색.결과 PCR확증획득고순도지고신표기DNA탐침,갑선알잡교액잡교현시JCV T항원존재우JCI세포적세포핵중,beclin 1화SERCA3 mRNA양성신호견우결장암화암방점막상피세포질중.ISP확증료지고신표기적JCV T항원DNA,현색후발현JCV T항원주요정위재JCI세포、폐포상피세포화폐암세포핵、위암급암방점막세포핵중.NBT/BCIP현색비Fuchsin현색경위민감,갑기록복염사득상술2충현색경가청석.결론 지고신표기적ISH화ISP조작간편,민감도고,NBT/BCIP현색화갑기록복염도상미관.
