西安交通大学学报（医学版）
西安交通大學學報（醫學版）
서안교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2013年
1期
7-10
,共4页
重组腺病毒%谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)%活性氧%基因治疗
重組腺病毒%穀胱苷肽過氧化物酶(GSH-Px)%活性氧%基因治療
중조선병독%곡광감태과양화물매(GSH-Px)%활성양%기인치료
目的 构建含人谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)基因的重组腺病毒载体,为基因治疗提供一种新的方法.方法 从人血中分离出白细胞,提取总RNA,采用RT-PCR法获得人GPx-1和人GPx-2的全长cDNA,克隆到pcDNA3.1+中,构建pcDNA3.1+GPx-1和pcDNA3.1+GPx-2载体,酶切和基因测序鉴定阳性克隆；采用酶切法把GPx-1和GPx-2基因克隆至入门载体pENTR1A中,构建pENTR1A-GPx-1和pENTR1A-GPx-2载体.采用LR反应,体外重组pENTR1A-GPx-1或pENTR1A-GPx-2和pAd/CMV/V5-DEST,得重组腺病毒表达载体pAd/CMV/V5-DEST-GPx-1和pAd/CMV/V5-DEST-GPx-2.PCR和序列测定鉴定重组腺病毒载体.293A细胞中包装和扩增GSH-Px-1和GSH-Px-2的重组腺病毒.结果 获得GSH-Px-1和GSH-Px-2的重组腺病毒载体和重组腺病毒.结论 成功构建了pAd/CMV/V5-DEST GPx-1和pAd/CMV/V5 DEST-GPx-2重组腺病毒载体,并在293A中获得该重组腺病毒,为进一步研究人GSH-Px基因在基因治疗中的作用奠定了基础.
目的 構建含人穀胱苷肽過氧化物酶(GSH-Px)基因的重組腺病毒載體,為基因治療提供一種新的方法.方法 從人血中分離齣白細胞,提取總RNA,採用RT-PCR法穫得人GPx-1和人GPx-2的全長cDNA,剋隆到pcDNA3.1+中,構建pcDNA3.1+GPx-1和pcDNA3.1+GPx-2載體,酶切和基因測序鑒定暘性剋隆；採用酶切法把GPx-1和GPx-2基因剋隆至入門載體pENTR1A中,構建pENTR1A-GPx-1和pENTR1A-GPx-2載體.採用LR反應,體外重組pENTR1A-GPx-1或pENTR1A-GPx-2和pAd/CMV/V5-DEST,得重組腺病毒錶達載體pAd/CMV/V5-DEST-GPx-1和pAd/CMV/V5-DEST-GPx-2.PCR和序列測定鑒定重組腺病毒載體.293A細胞中包裝和擴增GSH-Px-1和GSH-Px-2的重組腺病毒.結果 穫得GSH-Px-1和GSH-Px-2的重組腺病毒載體和重組腺病毒.結論 成功構建瞭pAd/CMV/V5-DEST GPx-1和pAd/CMV/V5 DEST-GPx-2重組腺病毒載體,併在293A中穫得該重組腺病毒,為進一步研究人GSH-Px基因在基因治療中的作用奠定瞭基礎.
목적 구건함인곡광감태과양화물매(GSH-Px)기인적중조선병독재체,위기인치료제공일충신적방법.방법 종인혈중분리출백세포,제취총RNA,채용RT-PCR법획득인GPx-1화인GPx-2적전장cDNA,극륭도pcDNA3.1+중,구건pcDNA3.1+GPx-1화pcDNA3.1+GPx-2재체,매절화기인측서감정양성극륭；채용매절법파GPx-1화GPx-2기인극륭지입문재체pENTR1A중,구건pENTR1A-GPx-1화pENTR1A-GPx-2재체.채용LR반응,체외중조pENTR1A-GPx-1혹pENTR1A-GPx-2화pAd/CMV/V5-DEST,득중조선병독표체재체pAd/CMV/V5-DEST-GPx-1화pAd/CMV/V5-DEST-GPx-2.PCR화서렬측정감정중조선병독재체.293A세포중포장화확증GSH-Px-1화GSH-Px-2적중조선병독.결과 획득GSH-Px-1화GSH-Px-2적중조선병독재체화중조선병독.결론 성공구건료pAd/CMV/V5-DEST GPx-1화pAd/CMV/V5 DEST-GPx-2중조선병독재체,병재293A중획득해중조선병독,위진일보연구인GSH-Px기인재기인치료중적작용전정료기출.
