中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2013年
2期
422-425
,共4页
王刚%姜博文%杨林花%聂欣%贾辰亮%刘静%申泉%柴宝峰
王剛%薑博文%楊林花%聶訢%賈辰亮%劉靜%申泉%柴寶峰
왕강%강박문%양림화%섭흔%가신량%류정%신천%시보봉
血友病B%凝血因子Ⅸ小基因%无义突变%稳定细胞株
血友病B%凝血因子Ⅸ小基因%無義突變%穩定細胞株
혈우병B%응혈인자Ⅸ소기인%무의돌변%은정세포주
本研究构建重组人凝血因子Ⅸ小基因及其无义突变体稳定细胞株并探讨其意义.将人凝血因子Ⅸ(F9)小基因克隆到哺乳动物表达载体pCMV-Tag3B上；利用PCR定点突变技术得到在小基因121位氨基酸位置含有一个提前终止密码子(premature termination codon,PTC)的无义突变体；将构建的F9小基因及其无义突变体分别转染人肝癌细胞HepG2,经G418抗性筛选,单克隆化扩大培养,得到稳定细胞株,分别命名为HepG2-WT和HepG2-N.结果显示:通过酶切鉴定、PCR鉴定及DNA测序分析证明,小基因及其无义突变体表达载体构建成功；通过RT-PCR及基因组PCR均扩增到了大小正确的目的基因片段,证明了含有重组人凝血因子Ⅸ小基因及其无义突变体的稳定细胞株构建成功.结论:本研究成功构建了重组人凝血因子Ⅸ小基因及其无义突变体稳定细胞株,该细胞株可用于无义突变导致血友病的治疗药物的筛选和PTC通读药物的筛选等.
本研究構建重組人凝血因子Ⅸ小基因及其無義突變體穩定細胞株併探討其意義.將人凝血因子Ⅸ(F9)小基因剋隆到哺乳動物錶達載體pCMV-Tag3B上；利用PCR定點突變技術得到在小基因121位氨基痠位置含有一箇提前終止密碼子(premature termination codon,PTC)的無義突變體；將構建的F9小基因及其無義突變體分彆轉染人肝癌細胞HepG2,經G418抗性篩選,單剋隆化擴大培養,得到穩定細胞株,分彆命名為HepG2-WT和HepG2-N.結果顯示:通過酶切鑒定、PCR鑒定及DNA測序分析證明,小基因及其無義突變體錶達載體構建成功；通過RT-PCR及基因組PCR均擴增到瞭大小正確的目的基因片段,證明瞭含有重組人凝血因子Ⅸ小基因及其無義突變體的穩定細胞株構建成功.結論:本研究成功構建瞭重組人凝血因子Ⅸ小基因及其無義突變體穩定細胞株,該細胞株可用于無義突變導緻血友病的治療藥物的篩選和PTC通讀藥物的篩選等.
본연구구건중조인응혈인자Ⅸ소기인급기무의돌변체은정세포주병탐토기의의.장인응혈인자Ⅸ(F9)소기인극륭도포유동물표체재체pCMV-Tag3B상；이용PCR정점돌변기술득도재소기인121위안기산위치함유일개제전종지밀마자(premature termination codon,PTC)적무의돌변체；장구건적F9소기인급기무의돌변체분별전염인간암세포HepG2,경G418항성사선,단극륭화확대배양,득도은정세포주,분별명명위HepG2-WT화HepG2-N.결과현시:통과매절감정、PCR감정급DNA측서분석증명,소기인급기무의돌변체표체재체구건성공；통과RT-PCR급기인조PCR균확증도료대소정학적목적기인편단,증명료함유중조인응혈인자Ⅸ소기인급기무의돌변체적은정세포주구건성공.결론:본연구성공구건료중조인응혈인자Ⅸ소기인급기무의돌변체은정세포주,해세포주가용우무의돌변도치혈우병적치료약물적사선화PTC통독약물적사선등.
