新疆农业科学
新疆農業科學
신강농업과학
XINJIANG AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
3期
572-577,582
,共7页
潘伊微%贺艳艳%潘辉%贾山岭%李莲瑞
潘伊微%賀豔豔%潘輝%賈山嶺%李蓮瑞
반이미%하염염%반휘%가산령%리련서
卡拉库尔羊TNF-α%表达纯化%抗原性分析
卡拉庫爾羊TNF-α%錶達純化%抗原性分析
잡랍고이양TNF-α%표체순화%항원성분석
[目的]克隆卡拉库尔羊TNF-α基因,在大肠杆菌中表达、纯化,并对TNF-α蛋白的抗原性进行分析.[方法]采用PCR技术扩增TNF-α基因核酸片段,并克隆入pET-28b表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)株中表达.用电洗脱法纯化目的蛋白,并用免疫印迹法分析纯化蛋白的抗原特异性.[结果]重组质粒在BI21 (DE3)菌株中经IPTG诱导表达一个相对分子质量约为49 KD的融合重组蛋白,原核表达质粒pET-28b-TNF-α表达的目的融合蛋白是以可溶的形式存在.用纯化的pET-28b-TNF-α免疫家兔,在免疫后的第45 d,Westem-blotting和琼脂糖扩散试验分析表明,表达的pET-28b-TNF-α能被家兔的阳性血清所识别.[结论]表达蛋白pET-28b-TNF-α具有较好的反应原性和免疫原性.
[目的]剋隆卡拉庫爾羊TNF-α基因,在大腸桿菌中錶達、純化,併對TNF-α蛋白的抗原性進行分析.[方法]採用PCR技術擴增TNF-α基因覈痠片段,併剋隆入pET-28b錶達質粒,在大腸桿菌BL21(DE3)株中錶達.用電洗脫法純化目的蛋白,併用免疫印跡法分析純化蛋白的抗原特異性.[結果]重組質粒在BI21 (DE3)菌株中經IPTG誘導錶達一箇相對分子質量約為49 KD的融閤重組蛋白,原覈錶達質粒pET-28b-TNF-α錶達的目的融閤蛋白是以可溶的形式存在.用純化的pET-28b-TNF-α免疫傢兔,在免疫後的第45 d,Westem-blotting和瓊脂糖擴散試驗分析錶明,錶達的pET-28b-TNF-α能被傢兔的暘性血清所識彆.[結論]錶達蛋白pET-28b-TNF-α具有較好的反應原性和免疫原性.
[목적]극륭잡랍고이양TNF-α기인,재대장간균중표체、순화,병대TNF-α단백적항원성진행분석.[방법]채용PCR기술확증TNF-α기인핵산편단,병극륭입pET-28b표체질립,재대장간균BL21(DE3)주중표체.용전세탈법순화목적단백,병용면역인적법분석순화단백적항원특이성.[결과]중조질립재BI21 (DE3)균주중경IPTG유도표체일개상대분자질량약위49 KD적융합중조단백,원핵표체질립pET-28b-TNF-α표체적목적융합단백시이가용적형식존재.용순화적pET-28b-TNF-α면역가토,재면역후적제45 d,Westem-blotting화경지당확산시험분석표명,표체적pET-28b-TNF-α능피가토적양성혈청소식별.[결론]표체단백pET-28b-TNF-α구유교호적반응원성화면역원성.
