CAJ | 학술논문

[目的]得到适用于罗布麻RAPD的最优体系.[方法]以伊犁地区新源县罗布麻硅胶干燥叶片为材料,采用TIANGEN试剂盒提取罗布麻基因组DNA,得到满足RAPD(Random amplified polymorphic DNA)分析的罗布麻基因组DNA.[结果]通过单因素优化实验,得到罗布麻RAPD分析的最佳反应体系为:Mg2+ (2.0mmol/L)、dNTPs(0.5 mmol./L)、primer(0.4 mmol/L)、DNA(1μL)、Tap酶取1μL、10×buffer取1μL,总反应体系为10 μL;扩增程序为:在94℃下预变性,然后进行42个循环(94℃变性30 s、38℃退火30 s、72℃延伸2min),最后在72℃延伸7 min.[结论]提取的罗布麻总DNA均有较高的质量,适合RAPD分析；Tiangen植物基因组DNA提取试剂盒对罗布麻基因组DNA有着良好的提取效果；对罗布麻RAPD-PCR中Mg2+、dNTPs、DNA聚合酶和引物浓度进行优化,较为理想的各因子用量和扩增程序为:Mg2+(2.0 mmol/L)、dNTPs(0.5mmol/L)、primer(0.4 mmol/L)、Tap酶(0.5 U/μL)、DNA(40 ng),总反应体系为10 μL;扩增程序为:在94℃下预变性5 min,然后进行42个循环(94℃变性30 s、38℃退火30 s、72℃延伸2 min),最后在72℃延伸7min.
[목적]득도괄용우라포마RAPD적최우체계.[방법]이이리지구신원현라포마규효간조협편위재료,채용TIANGEN시제합제취라포마기인조DNA,득도만족RAPD(Random amplified polymorphic DNA)분석적라포마기인조DNA.[결과]통과단인소우화실험,득도라포마RAPD분석적최가반응체계위:Mg2+ (2.0mmol/L)、dNTPs(0.5 mmol./L)、primer(0.4 mmol/L)、DNA(1μL)、Tap매취1μL、10×buffer취1μL,총반응체계위10 μL;확증정서위:재94℃하예변성,연후진행42개순배(94℃변성30 s、38℃퇴화30 s、72℃연신2min),최후재72℃연신7 min.[결론]제취적라포마총DNA균유교고적질량,괄합RAPD분석；Tiangen식물기인조DNA제취시제합대라포마기인조DNA유착량호적제취효과；대라포마RAPD-PCR중Mg2+、dNTPs、DNA취합매화인물농도진행우화,교위이상적각인자용량화확증정서위:Mg2+(2.0 mmol/L)、dNTPs(0.5mmol/L)、primer(0.4 mmol/L)、Tap매(0.5 U/μL)、DNA(40 ng),총반응체계위10 μL;확증정서위:재94℃하예변성5 min,연후진행42개순배(94℃변성30 s、38℃퇴화30 s、72℃연신2 min),최후재72℃연신7min.