中南医学科学杂志
中南醫學科學雜誌
중남의학과학잡지
JOURNAL OF UNIVERSITY OF SOUTH CHINA(MEDICAL EDITION)
2014年
1期
6-10
,共5页
游晓星%马小华%刘良专%曾焱华%朱翠明%何军%蒋传好%余敏君%吴移谋
遊曉星%馬小華%劉良專%曾焱華%硃翠明%何軍%蔣傳好%餘敏君%吳移謀
유효성%마소화%류량전%증염화%주취명%하군%장전호%여민군%오이모
支原体巨噬细胞活化脂肽-2%血红素氧合酶-1%NAD(P)H∶%醌氧化还原酶-1%NF-E2相关因子2
支原體巨噬細胞活化脂肽-2%血紅素氧閤酶-1%NAD(P)H∶%醌氧化還原酶-1%NF-E2相關因子2
지원체거서세포활화지태-2%혈홍소양합매-1%NAD(P)H∶%곤양화환원매-1%NF-E2상관인자2
macrophage-activating lipopeptide-2%hemoxygenase-1%NAD(P)H∶ quinone oxidoreductase 1%NF-E2-related factor 2
目的 观察支原体巨噬细胞活化脂肽-2(MALP-2)对THP-1单核细胞血红素氧合酶-1(HO-1)和NAD(P)H:醌氧化还原酶-1(NQO1)表达的影响,以明确机体抵抗支原体感染所致炎性损伤的自我防御机制.方法 体外培养THP-1细胞并分为对照组和实验组.其中对照组加入等体积培养基,实验组根据不同的实验目的 加入不同浓度的MALP-2作用5～120 min或12 h,Western blot 检测HO-1和NQO1表达以及Akt磷酸化水平.同时,采用PI3K抑制剂LY294002处理细胞,以证实PI3K参与HO-1表达.提取细胞核蛋白,凝胶迁移率实验和免疫荧光观察NF-E2相关因子2(Nrf2)的DNA结合活性和核转位情况,并采用特异性siRNA沉默Nrf2后,Western blot观察其对HO-1和NQO1表达的影响.结果 Western blot结果显示,MALP-2能诱导THP-1细胞表达HO-1和NQO1蛋白,且呈一定的剂量依赖性.此外,MALP-2能激活PI3K,且PI3K抑制剂能抑制HO-1和NQO1的表达;凝胶迁移率实验和激光共聚焦结果显示,MALP-2能增强Nrf2的DNA结合活性及核转位,而PI3K抑制剂处理后,Nrf2的DNA结合活性以及核转位水平进一步降低.RNA干扰Nrf2后,HO-1和NQO1表达显著降低.结论 MALP-2能诱导THP-1细胞表达HO-1和NQO1,其机制可能受PI3K/Nrf2调控.
目的 觀察支原體巨噬細胞活化脂肽-2(MALP-2)對THP-1單覈細胞血紅素氧閤酶-1(HO-1)和NAD(P)H:醌氧化還原酶-1(NQO1)錶達的影響,以明確機體牴抗支原體感染所緻炎性損傷的自我防禦機製.方法 體外培養THP-1細胞併分為對照組和實驗組.其中對照組加入等體積培養基,實驗組根據不同的實驗目的 加入不同濃度的MALP-2作用5～120 min或12 h,Western blot 檢測HO-1和NQO1錶達以及Akt燐痠化水平.同時,採用PI3K抑製劑LY294002處理細胞,以證實PI3K參與HO-1錶達.提取細胞覈蛋白,凝膠遷移率實驗和免疫熒光觀察NF-E2相關因子2(Nrf2)的DNA結閤活性和覈轉位情況,併採用特異性siRNA沉默Nrf2後,Western blot觀察其對HO-1和NQO1錶達的影響.結果 Western blot結果顯示,MALP-2能誘導THP-1細胞錶達HO-1和NQO1蛋白,且呈一定的劑量依賴性.此外,MALP-2能激活PI3K,且PI3K抑製劑能抑製HO-1和NQO1的錶達;凝膠遷移率實驗和激光共聚焦結果顯示,MALP-2能增彊Nrf2的DNA結閤活性及覈轉位,而PI3K抑製劑處理後,Nrf2的DNA結閤活性以及覈轉位水平進一步降低.RNA榦擾Nrf2後,HO-1和NQO1錶達顯著降低.結論 MALP-2能誘導THP-1細胞錶達HO-1和NQO1,其機製可能受PI3K/Nrf2調控.
목적 관찰지원체거서세포활화지태-2(MALP-2)대THP-1단핵세포혈홍소양합매-1(HO-1)화NAD(P)H:곤양화환원매-1(NQO1)표체적영향,이명학궤체저항지원체감염소치염성손상적자아방어궤제.방법 체외배양THP-1세포병분위대조조화실험조.기중대조조가입등체적배양기,실험조근거불동적실험목적 가입불동농도적MALP-2작용5～120 min혹12 h,Western blot 검측HO-1화NQO1표체이급Akt린산화수평.동시,채용PI3K억제제LY294002처리세포,이증실PI3K삼여HO-1표체.제취세포핵단백,응효천이솔실험화면역형광관찰NF-E2상관인자2(Nrf2)적DNA결합활성화핵전위정황,병채용특이성siRNA침묵Nrf2후,Western blot관찰기대HO-1화NQO1표체적영향.결과 Western blot결과현시,MALP-2능유도THP-1세포표체HO-1화NQO1단백,차정일정적제량의뢰성.차외,MALP-2능격활PI3K,차PI3K억제제능억제HO-1화NQO1적표체;응효천이솔실험화격광공취초결과현시,MALP-2능증강Nrf2적DNA결합활성급핵전위,이PI3K억제제처리후,Nrf2적DNA결합활성이급핵전위수평진일보강저.RNA간우Nrf2후,HO-1화NQO1표체현저강저.결론 MALP-2능유도THP-1세포표체HO-1화NQO1,기궤제가능수PI3K/Nrf2조공.
