广东药学院学报
廣東藥學院學報
엄동약학원학보
ACADEMIC JOURNAL OF GUANGDONG COLLEGE OF PHARMACY
2014年
1期
28-35
,共8页
黄洁燕%卢慧娟%熊燕%郭艳婕%谢晖%姬生国
黃潔燕%盧慧娟%熊燕%郭豔婕%謝暉%姬生國
황길연%로혜연%웅연%곽염첩%사휘%희생국
广藿香%DNA甲基化%甲基化敏感扩增多态性(MSAP)%表观遗传学
廣藿香%DNA甲基化%甲基化敏感擴增多態性(MSAP)%錶觀遺傳學
엄곽향%DNA갑기화%갑기화민감확증다태성(MSAP)%표관유전학
Pogostemon cablin (Blanco) Benth.%DNA methylation%methylation sensitive amplified polymorphism(MSAP)%epigenetics
目的 首次利用甲基化敏感扩增多态性(MSAP)技术开展广藿香表观遗传多样性研究,建立并优化广藿香MSAP技术分析的反应体系.方法 对MSAP技术中关键的步骤,包括酶切反应中的酶切时间和基因组DNA酶切量,预扩增反应中连接产物的稀释倍数、选择性扩增中预扩增产物的稀释倍数等条件进行了优化.同时,利用优化的条件,对81对引物进行初步的多态性筛选.结果 分步酶切,以1 000 ng DNA量进行EcoRⅠ(30 U)酶切5 h,纯化反应产物,再各取15 μL的EcoRⅠ酶切纯化产物进行MspⅠ/HapⅡ(10 U)酶切5 h,可完全酶切.优化后的反应体系得到条带清晰、特异性好、背景涂布少的选择性扩增产物.结论 建立了MSAP反应体系,保证MSAP图谱稳定、清晰;初步筛选出的32对引物组合,可用于后续广藿香DNA甲基化模式的相关研究.同时,也为其他药用植物提供甲基化敏感扩增多态性研究的依据.
目的 首次利用甲基化敏感擴增多態性(MSAP)技術開展廣藿香錶觀遺傳多樣性研究,建立併優化廣藿香MSAP技術分析的反應體繫.方法 對MSAP技術中關鍵的步驟,包括酶切反應中的酶切時間和基因組DNA酶切量,預擴增反應中連接產物的稀釋倍數、選擇性擴增中預擴增產物的稀釋倍數等條件進行瞭優化.同時,利用優化的條件,對81對引物進行初步的多態性篩選.結果 分步酶切,以1 000 ng DNA量進行EcoRⅠ(30 U)酶切5 h,純化反應產物,再各取15 μL的EcoRⅠ酶切純化產物進行MspⅠ/HapⅡ(10 U)酶切5 h,可完全酶切.優化後的反應體繫得到條帶清晰、特異性好、揹景塗佈少的選擇性擴增產物.結論 建立瞭MSAP反應體繫,保證MSAP圖譜穩定、清晰;初步篩選齣的32對引物組閤,可用于後續廣藿香DNA甲基化模式的相關研究.同時,也為其他藥用植物提供甲基化敏感擴增多態性研究的依據.
목적 수차이용갑기화민감확증다태성(MSAP)기술개전엄곽향표관유전다양성연구,건립병우화엄곽향MSAP기술분석적반응체계.방법 대MSAP기술중관건적보취,포괄매절반응중적매절시간화기인조DNA매절량,예확증반응중련접산물적희석배수、선택성확증중예확증산물적희석배수등조건진행료우화.동시,이용우화적조건,대81대인물진행초보적다태성사선.결과 분보매절,이1 000 ng DNA량진행EcoRⅠ(30 U)매절5 h,순화반응산물,재각취15 μL적EcoRⅠ매절순화산물진행MspⅠ/HapⅡ(10 U)매절5 h,가완전매절.우화후적반응체계득도조대청석、특이성호、배경도포소적선택성확증산물.결론 건립료MSAP반응체계,보증MSAP도보은정、청석;초보사선출적32대인물조합,가용우후속엄곽향DNA갑기화모식적상관연구.동시,야위기타약용식물제공갑기화민감확증다태성연구적의거.
