新生鼠肺成纤维细胞原代培养方法的比较与体外肌成纤维细胞分化模型的建立
신생서폐성섬유세포원대배양방법적비교여체외기성섬유세포분화모형적건립
Trypsin digestion versus tissue adherence in primary culture of lung fibroblasts from newborn rats and establishment of a myofibroblast differentiation model in vitro
  • 万方数据
    医学研究生学报 의학연구생학보
    JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATE
    2014年 2期 129-132 ,共4页

    孙月%徐洪%徐丁洁%魏中秋%于婉莹%邓海静%薛新新%杜世璞%杨方

    손월%서홍%서정길%위중추%우완형%산해정%설신신%두세박%양방

    成纤维细胞%原代培养%肌成纤维细胞 成纖維細胞%原代培養%肌成纖維細胞
    성섬유세포%원대배양%기성섬유세포
    Fibroblast%Primary culture%Myofibroblast
    目的 肌成纤维细胞(fibroblasts,FB)是器官纤维化形成过程中关键的靶细胞,以特异表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和细胞基质沉积为特征.文中比较胰蛋白酶消化法和组织贴壁法原代培养乳鼠肺FB的优缺点,并报道体外肌FB分化模型的建立.方法 分别采用胰蛋白酶消化法和组织贴壁法原代培养乳鼠肺FB,倒置相差显微镜观察原代培养,MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学染色法鉴定细胞来源,采用转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导FB向肌FB分化.结果 采用胰蛋白酶消化法和组织块贴壁法均可以成功原代培养鼠胚肺FB,2种方法无论在形态、细胞增殖水平还是在细胞鉴定方面均无差异,但胰蛋白酶消化法在相同条件下能够快速获得较组织贴壁法更多的细胞,且2种方法获得的FB在4代之内均不表达α-SMA,需经TGF-β1诱导分化为肌FB.随TGF-β1诱导时间的延长,α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白表达上调.结论胰酶消化法较组织贴壁法能快速、大量获得纯度较高的FB,4代以内的乳鼠FB适合建立肌FB分化模型.
    목적 기성섬유세포(fibroblasts,FB)시기관섬유화형성과정중관건적파세포,이특이표체α-평활기기동단백(α-smooth muscle actin,α-SMA)화세포기질침적위특정.문중비교이단백매소화법화조직첩벽법원대배양유서폐FB적우결점,병보도체외기FB분화모형적건립.방법 분별채용이단백매소화법화조직첩벽법원대배양유서폐FB,도치상차현미경관찰원대배양,MTT법검측세포증식,면역세포화학염색법감정세포래원,채용전화생장인자-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)유도FB향기FB분화.결과 채용이단백매소화법화조직괴첩벽법균가이성공원대배양서배폐FB,2충방법무론재형태、세포증식수평환시재세포감정방면균무차이,단이단백매소화법재상동조건하능구쾌속획득교조직첩벽법경다적세포,차2충방법획득적FB재4대지내균불표체α-SMA,수경TGF-β1유도분화위기FB.수TGF-β1유도시간적연장,α-SMA화Ⅰ형효원단백표체상조.결론이매소화법교조직첩벽법능쾌속、대량획득순도교고적FB,4대이내적유서FB괄합건립기FB분화모형.
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