中国药理学通报
中國藥理學通報
중국약이학통보
CHINESE PHARMACOLOGICAL BULLETIN
2014年
3期
387-392
,共6页
赵炜疆%潘洪超%李桂林%董丽萍%唐丹阳
趙煒疆%潘洪超%李桂林%董麗萍%唐丹暘
조위강%반홍초%리계림%동려평%당단양
噬菌体展示%结构域抗体%细胞黏附分子L1%神经损伤%SK-N-SH细胞系%信号通路
噬菌體展示%結構域抗體%細胞黏附分子L1%神經損傷%SK-N-SH細胞繫%信號通路
서균체전시%결구역항체%세포점부분자L1%신경손상%SK-N-SH세포계%신호통로
phage display%domain antibody%cell adhesion molecule L1%neuronal injury%SK-N-SH cell line%signaling pathway
目的 使用噬菌体展示技术筛选人源细胞黏附分子L1结构域抗体并体外观察其对神经来源细胞信号通路及细胞聚集的影响.方法 以L1纤黏连蛋白FN2-3区肽段为抗原,利用噬菌体抗体库(DAb library)筛选并纯化相应人源结构域抗体,并通过酶联免疫吸附法(ELISA)及免疫荧光观察抗体与抗原结合特性.给予神经来源SK-N-SH细胞抗体,使用蛋白质印迹(Western blot)观察24 h时其对L1下游信号通路Erk及Akt1激活的影响.使用结晶紫进行细胞染色观察抗体对细胞聚集的影响.结果 成功筛选出与L1FN2-3区肽段结合的结构域抗体H2-1,与SK-N-SH细胞内源性L1结合良好.与溶剂对照组相比,该抗体可有效促进SK-N-SH细胞中L1下游信号分子Erk1/2及Akt1磷酸化激活(分别为P＜0.01和P＜0.05),并可促进神经突生长及神经细胞聚集.结论 L1激动型结构域抗体可激活L1相关信号分子,促进神经突生长等作用,具有进一步实验治疗脊髓损伤等神经系统创伤性疾病的研究价值.
目的 使用噬菌體展示技術篩選人源細胞黏附分子L1結構域抗體併體外觀察其對神經來源細胞信號通路及細胞聚集的影響.方法 以L1纖黏連蛋白FN2-3區肽段為抗原,利用噬菌體抗體庫(DAb library)篩選併純化相應人源結構域抗體,併通過酶聯免疫吸附法(ELISA)及免疫熒光觀察抗體與抗原結閤特性.給予神經來源SK-N-SH細胞抗體,使用蛋白質印跡(Western blot)觀察24 h時其對L1下遊信號通路Erk及Akt1激活的影響.使用結晶紫進行細胞染色觀察抗體對細胞聚集的影響.結果 成功篩選齣與L1FN2-3區肽段結閤的結構域抗體H2-1,與SK-N-SH細胞內源性L1結閤良好.與溶劑對照組相比,該抗體可有效促進SK-N-SH細胞中L1下遊信號分子Erk1/2及Akt1燐痠化激活(分彆為P＜0.01和P＜0.05),併可促進神經突生長及神經細胞聚集.結論 L1激動型結構域抗體可激活L1相關信號分子,促進神經突生長等作用,具有進一步實驗治療脊髓損傷等神經繫統創傷性疾病的研究價值.
목적 사용서균체전시기술사선인원세포점부분자L1결구역항체병체외관찰기대신경래원세포신호통로급세포취집적영향.방법 이L1섬점련단백FN2-3구태단위항원,이용서균체항체고(DAb library)사선병순화상응인원결구역항체,병통과매련면역흡부법(ELISA)급면역형광관찰항체여항원결합특성.급여신경래원SK-N-SH세포항체,사용단백질인적(Western blot)관찰24 h시기대L1하유신호통로Erk급Akt1격활적영향.사용결정자진행세포염색관찰항체대세포취집적영향.결과 성공사선출여L1FN2-3구태단결합적결구역항체H2-1,여SK-N-SH세포내원성L1결합량호.여용제대조조상비,해항체가유효촉진SK-N-SH세포중L1하유신호분자Erk1/2급Akt1린산화격활(분별위P＜0.01화P＜0.05),병가촉진신경돌생장급신경세포취집.결론 L1격동형결구역항체가격활L1상관신호분자,촉진신경돌생장등작용,구유진일보실험치료척수손상등신경계통창상성질병적연구개치.
