中国药理学通报
中國藥理學通報
중국약이학통보
CHINESE PHARMACOLOGICAL BULLETIN
2014年
3期
381-386
,共6页
马佳佳%Nick Lu%陈必良
馬佳佳%Nick Lu%陳必良
마가가%Nick Lu%진필량
IL-23基因%真核表达%融合蛋白%基因转移%哮喘%妊娠
IL-23基因%真覈錶達%融閤蛋白%基因轉移%哮喘%妊娠
IL-23기인%진핵표체%융합단백%기인전이%효천%임신
IL-23 gene%eukaryotic expression%recombinant protein%gene transfer%asthma%pregnancy
目的 研究IL-23融合基因免疫调节及其生物学功能与妊娠期哮喘气道炎症的相关性.方法用构建表达IL-23 p40+p19双亚基真核表达质粒转化E.coil BL21菌,IPTG诱导表达产物纯化后,通过SDS-PAGE和蛋白质印迹法进行检测;荧光显微镜及Western blot法鉴定重组蛋白介导质粒转染结果,凝胶电泳迁移实验测定核蛋白的DNA结合活性变化;ELISA法、HE染色分析外源蛋白体内转移对小鼠血清炎性因子水平及肺组织炎症损伤影响;流式细胞术验证外周血单个核细胞中CD4+T细胞亚群比例.结果 成功获得可溶性重组外源蛋白可跨膜转运,并有效介导EGFP进入目标细胞,其稳定表达及转录活性均高于单纯质粒转染效应;GST/pCEP4-IL-23特异结合质粒DNA形成大分子复合体使凝胶迁移率降低;与LPS共同作用,明显增加致敏小鼠血清IL-17A含量(P＜0.05)和肺组织炎症病理反应程度;降低患者外周血IFN-γ、Foxp3水平,促进IL-4、IL-17A活化,进而升高Th2/Th1和Th17/Treg比值(P＜0.05).结论 重组IL-23蛋白具有致病性,参与妊娠哮喘炎症调控,CD4+T亚群免疫失衡共同对妊娠母体免疫耐受及疾病发生发展产生影响.
目的 研究IL-23融閤基因免疫調節及其生物學功能與妊娠期哮喘氣道炎癥的相關性.方法用構建錶達IL-23 p40+p19雙亞基真覈錶達質粒轉化E.coil BL21菌,IPTG誘導錶達產物純化後,通過SDS-PAGE和蛋白質印跡法進行檢測;熒光顯微鏡及Western blot法鑒定重組蛋白介導質粒轉染結果,凝膠電泳遷移實驗測定覈蛋白的DNA結閤活性變化;ELISA法、HE染色分析外源蛋白體內轉移對小鼠血清炎性因子水平及肺組織炎癥損傷影響;流式細胞術驗證外週血單箇覈細胞中CD4+T細胞亞群比例.結果 成功穫得可溶性重組外源蛋白可跨膜轉運,併有效介導EGFP進入目標細胞,其穩定錶達及轉錄活性均高于單純質粒轉染效應;GST/pCEP4-IL-23特異結閤質粒DNA形成大分子複閤體使凝膠遷移率降低;與LPS共同作用,明顯增加緻敏小鼠血清IL-17A含量(P＜0.05)和肺組織炎癥病理反應程度;降低患者外週血IFN-γ、Foxp3水平,促進IL-4、IL-17A活化,進而升高Th2/Th1和Th17/Treg比值(P＜0.05).結論 重組IL-23蛋白具有緻病性,參與妊娠哮喘炎癥調控,CD4+T亞群免疫失衡共同對妊娠母體免疫耐受及疾病髮生髮展產生影響.
목적 연구IL-23융합기인면역조절급기생물학공능여임신기효천기도염증적상관성.방법용구건표체IL-23 p40+p19쌍아기진핵표체질립전화E.coil BL21균,IPTG유도표체산물순화후,통과SDS-PAGE화단백질인적법진행검측;형광현미경급Western blot법감정중조단백개도질립전염결과,응효전영천이실험측정핵단백적DNA결합활성변화;ELISA법、HE염색분석외원단백체내전이대소서혈청염성인자수평급폐조직염증손상영향;류식세포술험증외주혈단개핵세포중CD4+T세포아군비례.결과 성공획득가용성중조외원단백가과막전운,병유효개도EGFP진입목표세포,기은정표체급전록활성균고우단순질립전염효응;GST/pCEP4-IL-23특이결합질립DNA형성대분자복합체사응효천이솔강저;여LPS공동작용,명현증가치민소서혈청IL-17A함량(P＜0.05)화폐조직염증병리반응정도;강저환자외주혈IFN-γ、Foxp3수평,촉진IL-4、IL-17A활화,진이승고Th2/Th1화Th17/Treg비치(P＜0.05).결론 중조IL-23단백구유치병성,삼여임신효천염증조공,CD4+T아군면역실형공동대임신모체면역내수급질병발생발전산생영향.
