畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2013年
10期
74-76
,共3页
张玲%郝永清%徐春光%黄海碧%张爱荣
張玲%郝永清%徐春光%黃海碧%張愛榮
장령%학영청%서춘광%황해벽%장애영
丝状支原体山羊亚种%LPPA%定点突变%表达
絲狀支原體山羊亞種%LPPA%定點突變%錶達
사상지원체산양아충%LPPA%정점돌변%표체
采用PCR的方法扩增出丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capriclonum,Mmc)模式株PG3的脂蛋白LPPA基因并对其反应原性进行了研究.该基因中含有1个密码子TGA,在支原体中编码色氨酸,却在原核表达系统中作为终止密码子,因此结合定点突变的方法将LPPA基因序列中TGA同义突变为TGG,并构建重组表达质粒pET-LPPA,然后将其转入宿主菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达产物经SDS-PAGE检测,在64 ku处出现目的条带,将重组蛋白纯化后经Western blot分析,重组蛋白能与Mmc模式株PG3兔高免血清发生特异性反应,具有良好的反应原性.
採用PCR的方法擴增齣絲狀支原體山羊亞種(Mycoplasma mycoides subsp.capriclonum,Mmc)模式株PG3的脂蛋白LPPA基因併對其反應原性進行瞭研究.該基因中含有1箇密碼子TGA,在支原體中編碼色氨痠,卻在原覈錶達繫統中作為終止密碼子,因此結閤定點突變的方法將LPPA基因序列中TGA同義突變為TGG,併構建重組錶達質粒pET-LPPA,然後將其轉入宿主菌BL21(DE3)中,IPTG誘導錶達產物經SDS-PAGE檢測,在64 ku處齣現目的條帶,將重組蛋白純化後經Western blot分析,重組蛋白能與Mmc模式株PG3兔高免血清髮生特異性反應,具有良好的反應原性.
채용PCR적방법확증출사상지원체산양아충(Mycoplasma mycoides subsp.capriclonum,Mmc)모식주PG3적지단백LPPA기인병대기반응원성진행료연구.해기인중함유1개밀마자TGA,재지원체중편마색안산,각재원핵표체계통중작위종지밀마자,인차결합정점돌변적방법장LPPA기인서렬중TGA동의돌변위TGG,병구건중조표체질립pET-LPPA,연후장기전입숙주균BL21(DE3)중,IPTG유도표체산물경SDS-PAGE검측,재64 ku처출현목적조대,장중조단백순화후경Western blot분석,중조단백능여Mmc모식주PG3토고면혈청발생특이성반응,구유량호적반응원성.
