CAJ | 학술논문

通过构建原核表达载体、优化原核表达条件和纯化表达产物来获得人白细胞介素-2(IL-2)的融合蛋白(His-IL2).将IL-2基因连接到pET100/D-TOPO载体中,经酶切鉴定和测序,构建了pET-IL2质粒.将质粒转化到大肠杆菌BL21 (DE3)中,通过优化诱导温度、诱导时间及IPTG诱导终浓度来减少包涵体的生成,从而提高可溶性蛋白的产量,由SDS-PAGE和Western blot证明IPTG诱导终浓度为0.6mmol/L、温度为25℃,诱导5h时可溶性蛋白含量明显高于包涵体,且该融合蛋白能够被特异性抗体所识别.分别以葡聚糖凝胶层析和Ni-IDA树脂亲和层析纯化His-IL2融合蛋白,比较两种不同的纯化方法对其蛋白纯化效率的影响,SDS-PAGE分析得出Ni-IDA树脂亲和层析对此融合蛋白纯化的特异性高,纯度达到85％左右.His-IL2融合蛋白的优化表达和纯化为进一步研究融合蛋白的活性与功能奠定了基础.
통과구건원핵표체재체、우화원핵표체조건화순화표체산물래획득인백세포개소-2(IL-2)적융합단백(His-IL2).장IL-2기인련접도pET100/D-TOPO재체중,경매절감정화측서,구건료pET-IL2질립.장질립전화도대장간균BL21 (DE3)중,통과우화유도온도、유도시간급IPTG유도종농도래감소포함체적생성,종이제고가용성단백적산량,유SDS-PAGE화Western blot증명IPTG유도종농도위0.6mmol/L、온도위25℃,유도5h시가용성단백함량명현고우포함체,차해융합단백능구피특이성항체소식별.분별이포취당응효층석화Ni-IDA수지친화층석순화His-IL2융합단백,비교량충불동적순화방법대기단백순화효솔적영향,SDS-PAGE분석득출Ni-IDA수지친화층석대차융합단백순화적특이성고,순도체도85％좌우.His-IL2융합단백적우화표체화순화위진일보연구융합단백적활성여공능전정료기출.