畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2013年
11期
69-72
,共4页
猪肺炎支原体%P97蛋白%表达%鉴定
豬肺炎支原體%P97蛋白%錶達%鑒定
저폐염지원체%P97단백%표체%감정
参考猪肺炎支原体基因组序列设计扩增P97基因片段的一对引物,利用PCR方法扩增出753 bp的基因片段,经测序鉴定正确后,将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,重组质粒转化大肠杆菌BL21 (DE3)表达菌,在IPTG诱导下重组蛋白P97获得表达,通过SDS-PAGE及Western blot鉴定重组蛋白的表达情况及蛋白活性.SDS-PAGE结果表明,获得了以包涵体形式表达的重组蛋白,该包涵体蛋白经变性、复性、亲和层析纯化后,Western blot鉴定表明重组蛋白能够被猪肺炎支原体阳性血清特异性识别,具有很好的反应活性与特异性,可以用于P97蛋白单克隆抗体的制备、P97蛋白结构与功能的研究,为进一步开发猪肺炎支原体快速检测试剂盒及新型疫苗研究奠定基础.
參攷豬肺炎支原體基因組序列設計擴增P97基因片段的一對引物,利用PCR方法擴增齣753 bp的基因片段,經測序鑒定正確後,將其定嚮剋隆至原覈錶達載體pGEX-4T-1中,重組質粒轉化大腸桿菌BL21 (DE3)錶達菌,在IPTG誘導下重組蛋白P97穫得錶達,通過SDS-PAGE及Western blot鑒定重組蛋白的錶達情況及蛋白活性.SDS-PAGE結果錶明,穫得瞭以包涵體形式錶達的重組蛋白,該包涵體蛋白經變性、複性、親和層析純化後,Western blot鑒定錶明重組蛋白能夠被豬肺炎支原體暘性血清特異性識彆,具有很好的反應活性與特異性,可以用于P97蛋白單剋隆抗體的製備、P97蛋白結構與功能的研究,為進一步開髮豬肺炎支原體快速檢測試劑盒及新型疫苗研究奠定基礎.
삼고저폐염지원체기인조서렬설계확증P97기인편단적일대인물,이용PCR방법확증출753 bp적기인편단,경측서감정정학후,장기정향극륭지원핵표체재체pGEX-4T-1중,중조질립전화대장간균BL21 (DE3)표체균,재IPTG유도하중조단백P97획득표체,통과SDS-PAGE급Western blot감정중조단백적표체정황급단백활성.SDS-PAGE결과표명,획득료이포함체형식표체적중조단백,해포함체단백경변성、복성、친화층석순화후,Western blot감정표명중조단백능구피저폐염지원체양성혈청특이성식별,구유흔호적반응활성여특이성,가이용우P97단백단극륭항체적제비、P97단백결구여공능적연구,위진일보개발저폐염지원체쾌속검측시제합급신형역묘연구전정기출.
