CAJ | 학술논문

为了构建A型口蹄疫重组表达质粒,并鉴定其在BHK-21细胞中的表达效果及免疫活性,通过设计引物及酶切位点,获得A型口蹄疫毒株AF/72的P1,2A及3C编码区的目的基因片段,利用设计的BamH Ⅰ及Xba Ⅰ酶切位点,定向将片段克隆于真核表达载体pcDNA3.1(+),经筛选、鉴定及序列分析后,将重组阳性质粒pcDNA3.1/P12A3C转染BHK-21细胞,通过双抗体夹心ELISA方法、间接免疫荧光标记方法及电镜透射法,检测细胞中表达的蛋白.结果表明:目的片段正确克隆到pcDNA3.1真核表达载体上,转染BHK-21细胞后,几种方法都能够检测表达蛋白.由此得出结论,构建的A型pcDNA3.1/P12A3C重组质粒能够在BHK-21细胞中正确表达目的蛋白并能组装成病毒空衣壳,表达蛋白具有良好的免疫活性,为进一步研究该质粒的动物免疫试验奠定了基础.
위료구건A형구제역중조표체질립,병감정기재BHK-21세포중적표체효과급면역활성,통과설계인물급매절위점,획득A형구제역독주AF/72적P1,2A급3C편마구적목적기인편단,이용설계적BamH Ⅰ급Xba Ⅰ매절위점,정향장편단극륭우진핵표체재체pcDNA3.1(+),경사선、감정급서렬분석후,장중조양성질립pcDNA3.1/P12A3C전염BHK-21세포,통과쌍항체협심ELISA방법、간접면역형광표기방법급전경투사법,검측세포중표체적단백.결과표명:목적편단정학극륭도pcDNA3.1진핵표체재체상,전염BHK-21세포후,궤충방법도능구검측표체단백.유차득출결론,구건적A형pcDNA3.1/P12A3C중조질립능구재BHK-21세포중정학표체목적단백병능조장성병독공의각,표체단백구유량호적면역활성,위진일보연구해질립적동물면역시험전정료기출.