CAJ | 학술논문

目的观察大豆异黄酮对负载于脱细胞羊膜上的软骨细胞增殖及其胰岛素样生子因子-1 (IGF-1) mRNA基因表达的影响,为组织工程软骨的临床应用奠定基础.方法无菌条件下酶消化法分离、培养新生兔软骨细胞;酶消化法和物理法无菌制备脱细胞羊膜;取第三代软骨细胞接种到脱细胞羊膜上.实验组分别加入含10-9、10-8、10-7mol/L的大豆异黄酮DMEM/F-12培养液,对照组为DMEM/F-12培养液.亚甲蓝染色观察羊膜经酶消化法结合物理法脱细胞的程度、倒置显微镜下观察分离的软骨细胞及其复合到羊膜上的形态,甲苯胺蓝染色观察软骨细胞与脱细胞羊膜的复合.MTT法检测各组软骨细胞增殖率,RT-PCR方法定量检测各组软骨细胞IGF-1 mRNA基因表达量.结果原代分离、贴壁的软骨细胞多呈三角型、梭型,培养至5d时,铺满瓶底,呈“铺路石”状.亚甲蓝染色显示羊膜脱细胞后膜上未见异染蓝色细胞.第三代软骨细胞接种到脱细胞羊膜1d后,可见部分软骨细胞伸出伪足,细胞呈圆形或三角形.甲苯胺蓝染色显示软骨细胞复合在脱细胞羊膜上4d后,细胞形态无明显改变,形态多为三角型和梭型,基质蓝染,细胞核呈深蓝色.10-9、10-8、10-7 mol/L 3个浓度的大豆异黄酮在软骨细胞接种到脱细胞羊膜上4d后均能促进负载于羊膜上的软骨细胞的增殖,并且10-7mol/L浓度的大豆异黄酮明显高于对照组(P＜0.05).RT-PCR结果显示大豆异黄酮可促进软骨细胞表达IGF-1 mRNA,表达量明显高于对照组(P＜0.05),且具有一定的剂量依赖性.结论大豆异黄酮可促进负载于脱细胞羊膜上的软骨细胞的增殖及其IGF-1 mRNA的表达.
목적 관찰대두이황동대부재우탈세포양막상적연골세포증식급기이도소양생자인자-1 (IGF-1) mRNA기인표체적영향,위조직공정연골적림상응용전정기출.방법 무균조건하매소화법분리、배양신생토연골세포;매소화법화물리법무균제비탈세포양막;취제삼대연골세포접충도탈세포양막상.실험조분별가입함10-9、10-8、10-7mol/L적대두이황동DMEM/F-12배양액,대조조위DMEM/F-12배양액.아갑람염색관찰양막경매소화법결합물리법탈세포적정도、도치현미경하관찰분리적연골세포급기복합도양막상적형태,갑분알람염색관찰연골세포여탈세포양막적복합.MTT법검측각조연골세포증식솔,RT-PCR방법정량검측각조연골세포IGF-1 mRNA기인표체량.결과 원대분리、첩벽적연골세포다정삼각형、사형,배양지5d시,포만병저,정“포로석”상.아갑람염색현시양막탈세포후막상미견이염람색세포.제삼대연골세포접충도탈세포양막1d후,가견부분연골세포신출위족,세포정원형혹삼각형.갑분알람염색현시연골세포복합재탈세포양막상4d후,세포형태무명현개변,형태다위삼각형화사형,기질람염,세포핵정심람색.10-9、10-8、10-7 mol/L 3개농도적대두이황동재연골세포접충도탈세포양막상4d후균능촉진부재우양막상적연골세포적증식,병차10-7mol/L농도적대두이황동명현고우대조조(P＜0.05).RT-PCR결과현시대두이황동가촉진연골세포표체IGF-1 mRNA,표체량명현고우대조조(P＜0.05),차구유일정적제량의뢰성.결론 대두이황동가촉진부재우탈세포양막상적연골세포적증식급기IGF-1 mRNA적표체.