遵义医学院学报
遵義醫學院學報
준의의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE ZUNYI
2014年
2期
156-160
,共5页
李永菊%周涯%陈超%朱顺飞%胡燕%秦娜琳%郑静%徐林
李永菊%週涯%陳超%硃順飛%鬍燕%秦娜琳%鄭靜%徐林
리영국%주애%진초%주순비%호연%진나림%정정%서림
微小RNA-7%海绵体%95D细胞%载体构建%基因表达
微小RNA-7%海綿體%95D細胞%載體構建%基因錶達
미소RNA-7%해면체%95D세포%재체구건%기인표체
目的 构建pG-miR-7-Sponge转基因小鼠的真核载体并检测其表达活性,为转基因小鼠的建立提供前期实验基础.方法 利用miRNA sponge(海绵体)技术原理,合成miR-7-Sponge序列,酶切连接入真核表达载体eGFP-C2并转化Stbl3感受态细胞,克隆PCR、酶切和测序鉴定重组载体eGFP-C2-miR-7-Sponge(简称pG-miR-7-Sp);将重组载体pG-miR-7-Sp体外瞬时转染人肺癌95D细胞,荧光显微镜下观察细胞的GFP表达情况;Real-Time PCR检测细胞中miRNA-7的表达;MTT法检测细胞的增殖变化.结果 经克隆PCR、酶切鉴定及测序分析,成功构建了真核表达载体pG-miR-7-Sp;pG-miR-7-Sp瞬时转染95D细胞48 h后,与对照组细胞相比,miR-7表达水平明显降低(P＜0.05);同时细胞的生长明显加快(P＜0.05).结论 成功构建pG-miR-7-Sp真核表达载体.
目的 構建pG-miR-7-Sponge轉基因小鼠的真覈載體併檢測其錶達活性,為轉基因小鼠的建立提供前期實驗基礎.方法 利用miRNA sponge(海綿體)技術原理,閤成miR-7-Sponge序列,酶切連接入真覈錶達載體eGFP-C2併轉化Stbl3感受態細胞,剋隆PCR、酶切和測序鑒定重組載體eGFP-C2-miR-7-Sponge(簡稱pG-miR-7-Sp);將重組載體pG-miR-7-Sp體外瞬時轉染人肺癌95D細胞,熒光顯微鏡下觀察細胞的GFP錶達情況;Real-Time PCR檢測細胞中miRNA-7的錶達;MTT法檢測細胞的增殖變化.結果 經剋隆PCR、酶切鑒定及測序分析,成功構建瞭真覈錶達載體pG-miR-7-Sp;pG-miR-7-Sp瞬時轉染95D細胞48 h後,與對照組細胞相比,miR-7錶達水平明顯降低(P＜0.05);同時細胞的生長明顯加快(P＜0.05).結論 成功構建pG-miR-7-Sp真覈錶達載體.
목적 구건pG-miR-7-Sponge전기인소서적진핵재체병검측기표체활성,위전기인소서적건립제공전기실험기출.방법 이용miRNA sponge(해면체)기술원리,합성miR-7-Sponge서렬,매절련접입진핵표체재체eGFP-C2병전화Stbl3감수태세포,극륭PCR、매절화측서감정중조재체eGFP-C2-miR-7-Sponge(간칭pG-miR-7-Sp);장중조재체pG-miR-7-Sp체외순시전염인폐암95D세포,형광현미경하관찰세포적GFP표체정황;Real-Time PCR검측세포중miRNA-7적표체;MTT법검측세포적증식변화.결과 경극륭PCR、매절감정급측서분석,성공구건료진핵표체재체pG-miR-7-Sp;pG-miR-7-Sp순시전염95D세포48 h후,여대조조세포상비,miR-7표체수평명현강저(P＜0.05);동시세포적생장명현가쾌(P＜0.05).결론 성공구건pG-miR-7-Sp진핵표체재체.
