中华脑科疾病与康复杂志（电子版）
中華腦科疾病與康複雜誌（電子版）
중화뇌과질병여강복잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF BRAIN DI8SEASES AND REHABILITATIN(ELECTRONIC EDITION)
2013年
4期
244-247
,共4页
尚爱加%程诚%张月高%冯兴军%周定标
尚愛加%程誠%張月高%馮興軍%週定標
상애가%정성%장월고%풍흥군%주정표
转染%慢病毒属%脑红蛋白%病毒包装
轉染%慢病毒屬%腦紅蛋白%病毒包裝
전염%만병독속%뇌홍단백%병독포장
目的 构建携带大鼠脑红蛋白(rat neuroglobin,rNGB)基因的慢病毒真核表达载体pLenti6/V5-rNGB,转染293细胞,观察外源性NGB在293细胞中的表达情况.方法 应用基因重组技术,从大鼠脑组织中获得rNGB基因片段,重组到pLenti6/V5慢病毒真核表达载体上.pLenti6/V5-rNGB经病毒包装,转染至293细胞,而后行rNGB Western blot和免疫细胞化学检测.结果 PCR扩增序列为456bpNGB基因,用Xho-Ⅰ和BamH-Ⅰ进行双酶切显示NGB序列已插入pLenti6/V5慢病毒表达载体,DNA序列鉴定进一步证实插入基因片段的正确性;293细胞转染pLenti6/V5-rNGB后荧光显微镜下发出绿色荧光,证实慢病毒表达载体转入包装细胞;进一步采取Western blot方法和免疫组化方法证实rNGB在包装细胞内有效表达,而pLEGFP-NI转染的细胞只检测到NGB蛋白微弱表达,两组比较有统计学差异(相对表达量分别为25.32±1.05、0,t=-39.63,P<0.01).结论 构建的pLenti6/V5-rNGB,经病毒包装转染至293细胞,rNGB和EGFP基因在细胞内有效表达,为pLenti6/V5-rNGB治疗相关疾病的实验研究奠定了基础.
目的 構建攜帶大鼠腦紅蛋白(rat neuroglobin,rNGB)基因的慢病毒真覈錶達載體pLenti6/V5-rNGB,轉染293細胞,觀察外源性NGB在293細胞中的錶達情況.方法 應用基因重組技術,從大鼠腦組織中穫得rNGB基因片段,重組到pLenti6/V5慢病毒真覈錶達載體上.pLenti6/V5-rNGB經病毒包裝,轉染至293細胞,而後行rNGB Western blot和免疫細胞化學檢測.結果 PCR擴增序列為456bpNGB基因,用Xho-Ⅰ和BamH-Ⅰ進行雙酶切顯示NGB序列已插入pLenti6/V5慢病毒錶達載體,DNA序列鑒定進一步證實插入基因片段的正確性;293細胞轉染pLenti6/V5-rNGB後熒光顯微鏡下髮齣綠色熒光,證實慢病毒錶達載體轉入包裝細胞;進一步採取Western blot方法和免疫組化方法證實rNGB在包裝細胞內有效錶達,而pLEGFP-NI轉染的細胞隻檢測到NGB蛋白微弱錶達,兩組比較有統計學差異(相對錶達量分彆為25.32±1.05、0,t=-39.63,P<0.01).結論 構建的pLenti6/V5-rNGB,經病毒包裝轉染至293細胞,rNGB和EGFP基因在細胞內有效錶達,為pLenti6/V5-rNGB治療相關疾病的實驗研究奠定瞭基礎.
목적 구건휴대대서뇌홍단백(rat neuroglobin,rNGB)기인적만병독진핵표체재체pLenti6/V5-rNGB,전염293세포,관찰외원성NGB재293세포중적표체정황.방법 응용기인중조기술,종대서뇌조직중획득rNGB기인편단,중조도pLenti6/V5만병독진핵표체재체상.pLenti6/V5-rNGB경병독포장,전염지293세포,이후행rNGB Western blot화면역세포화학검측.결과 PCR확증서렬위456bpNGB기인,용Xho-Ⅰ화BamH-Ⅰ진행쌍매절현시NGB서렬이삽입pLenti6/V5만병독표체재체,DNA서렬감정진일보증실삽입기인편단적정학성;293세포전염pLenti6/V5-rNGB후형광현미경하발출록색형광,증실만병독표체재체전입포장세포;진일보채취Western blot방법화면역조화방법증실rNGB재포장세포내유효표체,이pLEGFP-NI전염적세포지검측도NGB단백미약표체,량조비교유통계학차이(상대표체량분별위25.32±1.05、0,t=-39.63,P<0.01).결론 구건적pLenti6/V5-rNGB,경병독포장전염지293세포,rNGB화EGFP기인재세포내유효표체,위pLenti6/V5-rNGB치료상관질병적실험연구전정료기출.
