中山大学学报（医学科学版）
中山大學學報（醫學科學版）
중산대학학보（의학과학판）
JOURNAL OF SUN YAT-SEN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2014年
3期
321-328
,共8页
魏美丽%陈燕霞%王宇%徐俊%熊为亮%姜世勃%潘春根
魏美麗%陳燕霞%王宇%徐俊%熊為亮%薑世勃%潘春根
위미려%진연하%왕우%서준%웅위량%강세발%반춘근
甲型流感病毒%通用疫苗%HA2%三聚体
甲型流感病毒%通用疫苗%HA2%三聚體
갑형류감병독%통용역묘%HA2%삼취체
Influenza A virus%universal vaccine%HA2%trimeric
[目的]探讨以流感病毒(IAV)血凝素蛋白茎部(HA2)保守表位为免疫原来诱导针对不同血清型流感病毒的广谱体液免疫应答.[方法]我们构建了一个重组的IAV疫苗IR30-Fd,由A/Viet Nam/1203/2004 (H5N1)病毒株HA2的30个保守的氨基酸残基(IR30)和一个连在碳端的三聚体基序(foldon,Fd)组成.原核表达该蛋白,圆二色谱和Western Blot验证IR-30-Fd的室间结构之后,分别免疫BALB/c小鼠和新西兰白兔,并同时免疫IR30多肽为对照,制备血清抗体.然后应用ELISA和Western Blot方法检测抗体的滴度,应用细胞ELISA和Western Blot方法检测抗体与不同的IAV菌株HA2蛋白的交叉反应性.[结果]IR30-Fd能够形成具有α螺旋的三聚体空间结构.用IR30-Fd和IR30免疫BALB/c小鼠和新西兰白兔后获得了高效价的抗IR30的特异性抗体.鼠抗IR30-Fd抗体能与H3N2和H1N1的HA蛋白反应而鼠抗IR30抗体不能.鼠抗IR30-Fd抗体稀释6 400倍、兔抗IR30-Fd抗体稀释8.2×105倍均可以与H5N1的HA蛋白反应.细胞ELISA表明兔抗IR30-Fd抗体与天然状态下的H5N1和H3N2的HA蛋白的结合亲和力高于兔抗IR30抗体.[结论]本研究结果表明IR30-Fd蛋白能够模拟H5N1 HA2蛋白保守序列的天然三聚体结构,并且能够诱导产生针对H5N1H1N1和H3N2亚型HA蛋白的广谱交叉反应抗体,为研制通用的流感病毒疫苗提供了结构基础.
[目的]探討以流感病毒(IAV)血凝素蛋白莖部(HA2)保守錶位為免疫原來誘導針對不同血清型流感病毒的廣譜體液免疫應答.[方法]我們構建瞭一箇重組的IAV疫苗IR30-Fd,由A/Viet Nam/1203/2004 (H5N1)病毒株HA2的30箇保守的氨基痠殘基(IR30)和一箇連在碳耑的三聚體基序(foldon,Fd)組成.原覈錶達該蛋白,圓二色譜和Western Blot驗證IR-30-Fd的室間結構之後,分彆免疫BALB/c小鼠和新西蘭白兔,併同時免疫IR30多肽為對照,製備血清抗體.然後應用ELISA和Western Blot方法檢測抗體的滴度,應用細胞ELISA和Western Blot方法檢測抗體與不同的IAV菌株HA2蛋白的交扠反應性.[結果]IR30-Fd能夠形成具有α螺鏇的三聚體空間結構.用IR30-Fd和IR30免疫BALB/c小鼠和新西蘭白兔後穫得瞭高效價的抗IR30的特異性抗體.鼠抗IR30-Fd抗體能與H3N2和H1N1的HA蛋白反應而鼠抗IR30抗體不能.鼠抗IR30-Fd抗體稀釋6 400倍、兔抗IR30-Fd抗體稀釋8.2×105倍均可以與H5N1的HA蛋白反應.細胞ELISA錶明兔抗IR30-Fd抗體與天然狀態下的H5N1和H3N2的HA蛋白的結閤親和力高于兔抗IR30抗體.[結論]本研究結果錶明IR30-Fd蛋白能夠模擬H5N1 HA2蛋白保守序列的天然三聚體結構,併且能夠誘導產生針對H5N1H1N1和H3N2亞型HA蛋白的廣譜交扠反應抗體,為研製通用的流感病毒疫苗提供瞭結構基礎.
[목적]탐토이류감병독(IAV)혈응소단백경부(HA2)보수표위위면역원래유도침대불동혈청형류감병독적엄보체액면역응답.[방법]아문구건료일개중조적IAV역묘IR30-Fd,유A/Viet Nam/1203/2004 (H5N1)병독주HA2적30개보수적안기산잔기(IR30)화일개련재탄단적삼취체기서(foldon,Fd)조성.원핵표체해단백,원이색보화Western Blot험증IR-30-Fd적실간결구지후,분별면역BALB/c소서화신서란백토,병동시면역IR30다태위대조,제비혈청항체.연후응용ELISA화Western Blot방법검측항체적적도,응용세포ELISA화Western Blot방법검측항체여불동적IAV균주HA2단백적교차반응성.[결과]IR30-Fd능구형성구유α라선적삼취체공간결구.용IR30-Fd화IR30면역BALB/c소서화신서란백토후획득료고효개적항IR30적특이성항체.서항IR30-Fd항체능여H3N2화H1N1적HA단백반응이서항IR30항체불능.서항IR30-Fd항체희석6 400배、토항IR30-Fd항체희석8.2×105배균가이여H5N1적HA단백반응.세포ELISA표명토항IR30-Fd항체여천연상태하적H5N1화H3N2적HA단백적결합친화력고우토항IR30항체.[결론]본연구결과표명IR30-Fd단백능구모의H5N1 HA2단백보수서렬적천연삼취체결구,병차능구유도산생침대H5N1H1N1화H3N2아형HA단백적엄보교차반응항체,위연제통용적류감병독역묘제공료결구기출.
