中国防痨杂志
中國防癆雜誌
중국방로잡지
BULLETIN OF THE CHINESE ANTITUBERCULOSIS ASSOCIATION
2014年
5期
350-355
,共6页
王前%宋媛媛%池俊英%王玉峰%赵雁林
王前%宋媛媛%池俊英%王玉峰%趙雁林
왕전%송원원%지준영%왕옥봉%조안림
分枝杆菌,结核%荧光喹诺酮类%抗药性,细菌%DNA促旋酶
分枝桿菌,結覈%熒光喹諾酮類%抗藥性,細菌%DNA促鏇酶
분지간균,결핵%형광규낙동류%항약성,세균%DNA촉선매
Mycobacterium tuberculosis%Fluoroquinolones%Drug resistance,bacterial%DNA Gyrase
目的 探讨单耐氧氟沙星的结核分枝杆菌中耐药相关基因突变及外排泵基因PstB两种不同耐药机制的作用.方法 从国家结核病参比实验室2007年全国耐药基线调查菌株库中挑选单耐氧氟沙星的菌株17株.采用直接测序法检测利福平耐药相关基因gyrA和gyrB突变情况.提取gyrA和gyrB无突变菌株的RNA后反转录并采用Real-time PCR方法检测20个药物外排泵基因的表达量,对比菌株最低抑菌浓度(MIC)试验结果,筛选可能与氧氟沙星药物外排泵的相关基因,并选用大肠埃希菌为模式生物构建表达载体,检测过表达目的外排泵蛋白的大肠埃希菌对氧氟沙星的耐药程度加以验证.结果 在17株单耐氧氟沙星的菌株中,有4株(4/17)检测到gyrA突变,其中包括90位点突变1株及94位点突变3株,上述突变均表现为高浓度耐药,其MIC均不低于4μg/ml.在gyrA和gyrB未突变菌株中,通过real-time PCR检测发现在高浓度耐药的2株菌株中,Rv0933和Rv2938的转录水平显著高于其他低浓度耐药菌株,较对照株H37Rv转录水平高16倍和5倍.在对照组和转入pEASY-E1-Rv2938的大肠埃希菌中MIC均小于0.125 μg/ml,而转入pEASY-E1-Rv0933的大肠埃希菌的MIC为2μg/ml.结论 本研究结果显示,gyrA耐药决定区基因突变与氧氟沙星高浓度耐药相关,RstB可能是氧氟沙星特异性的药物外排泵基因,其高水平表达与氧氟沙星高浓度耐药相关.
目的 探討單耐氧氟沙星的結覈分枝桿菌中耐藥相關基因突變及外排泵基因PstB兩種不同耐藥機製的作用.方法 從國傢結覈病參比實驗室2007年全國耐藥基線調查菌株庫中挑選單耐氧氟沙星的菌株17株.採用直接測序法檢測利福平耐藥相關基因gyrA和gyrB突變情況.提取gyrA和gyrB無突變菌株的RNA後反轉錄併採用Real-time PCR方法檢測20箇藥物外排泵基因的錶達量,對比菌株最低抑菌濃度(MIC)試驗結果,篩選可能與氧氟沙星藥物外排泵的相關基因,併選用大腸埃希菌為模式生物構建錶達載體,檢測過錶達目的外排泵蛋白的大腸埃希菌對氧氟沙星的耐藥程度加以驗證.結果 在17株單耐氧氟沙星的菌株中,有4株(4/17)檢測到gyrA突變,其中包括90位點突變1株及94位點突變3株,上述突變均錶現為高濃度耐藥,其MIC均不低于4μg/ml.在gyrA和gyrB未突變菌株中,通過real-time PCR檢測髮現在高濃度耐藥的2株菌株中,Rv0933和Rv2938的轉錄水平顯著高于其他低濃度耐藥菌株,較對照株H37Rv轉錄水平高16倍和5倍.在對照組和轉入pEASY-E1-Rv2938的大腸埃希菌中MIC均小于0.125 μg/ml,而轉入pEASY-E1-Rv0933的大腸埃希菌的MIC為2μg/ml.結論 本研究結果顯示,gyrA耐藥決定區基因突變與氧氟沙星高濃度耐藥相關,RstB可能是氧氟沙星特異性的藥物外排泵基因,其高水平錶達與氧氟沙星高濃度耐藥相關.
목적 탐토단내양불사성적결핵분지간균중내약상관기인돌변급외배빙기인PstB량충불동내약궤제적작용.방법 종국가결핵병삼비실험실2007년전국내약기선조사균주고중도선단내양불사성적균주17주.채용직접측서법검측리복평내약상관기인gyrA화gyrB돌변정황.제취gyrA화gyrB무돌변균주적RNA후반전록병채용Real-time PCR방법검측20개약물외배빙기인적표체량,대비균주최저억균농도(MIC)시험결과,사선가능여양불사성약물외배빙적상관기인,병선용대장애희균위모식생물구건표체재체,검측과표체목적외배빙단백적대장애희균대양불사성적내약정도가이험증.결과 재17주단내양불사성적균주중,유4주(4/17)검측도gyrA돌변,기중포괄90위점돌변1주급94위점돌변3주,상술돌변균표현위고농도내약,기MIC균불저우4μg/ml.재gyrA화gyrB미돌변균주중,통과real-time PCR검측발현재고농도내약적2주균주중,Rv0933화Rv2938적전록수평현저고우기타저농도내약균주,교대조주H37Rv전록수평고16배화5배.재대조조화전입pEASY-E1-Rv2938적대장애희균중MIC균소우0.125 μg/ml,이전입pEASY-E1-Rv0933적대장애희균적MIC위2μg/ml.결론 본연구결과현시,gyrA내약결정구기인돌변여양불사성고농도내약상관,RstB가능시양불사성특이성적약물외배빙기인,기고수평표체여양불사성고농도내약상관.
