安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2014年
4期
443-447
,共5页
徐鹏%宋旆文%章仁杰%刘超%申才良
徐鵬%宋旆文%章仁傑%劉超%申纔良
서붕%송패문%장인걸%류초%신재량
大鼠%神经干细胞%细胞培养%免疫印迹
大鼠%神經榦細胞%細胞培養%免疫印跡
대서%신경간세포%세포배양%면역인적
rat%neural stem cell%cell culture%Western blot
目的 建立新生SD大鼠神经干细胞(NSCs)的分离培养、体外分化、鉴定及体外长期培养的方法,并探讨血清浓度对NSCs分化的影响.方法 取新生SD大鼠大脑组织,用无血清培养技术培养NSCs.采用免疫荧光技术对NSCs进行鉴定,检测其巢蛋白(Nestin)表达.用含有不同胎牛血清(FBS)浓度(2％、5％、10％)的DMEM/F-12培养基诱导NSCs分化,分别用神经元特异性微管相关蛋白2(MAP-2)抗体、神经胶质细胞特异性胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体行免疫荧光染色鉴定分化细胞.通过Western blot法检测不同FBS浓度的分化条件下MAP-2与GFAP的表达情况.结果 获得大量未分化且悬浮生长的NSCs球,并能分化为神经元和神经胶质细胞.随着血清浓度的增加,各组MAP-2的表达逐渐增加(P＜0.05),GFAP的表达逐渐减少(P＜0.05).结论 应用无血清培养技术可成功在体外培养出具有增殖、自我更新及多潜能分化能力的新生大鼠NSCs,可于含有不同FBS浓度(2％、5％、10％)的分化条件下进一步分化为神经元及神经胶质细胞,含低浓度血清的条件培养基促进NSCs向神经元方向分化,而高浓度血清则有利于NSCs向神经胶质细胞方向分化.
目的 建立新生SD大鼠神經榦細胞(NSCs)的分離培養、體外分化、鑒定及體外長期培養的方法,併探討血清濃度對NSCs分化的影響.方法 取新生SD大鼠大腦組織,用無血清培養技術培養NSCs.採用免疫熒光技術對NSCs進行鑒定,檢測其巢蛋白(Nestin)錶達.用含有不同胎牛血清(FBS)濃度(2％、5％、10％)的DMEM/F-12培養基誘導NSCs分化,分彆用神經元特異性微管相關蛋白2(MAP-2)抗體、神經膠質細胞特異性膠質纖維痠性蛋白(GFAP)抗體行免疫熒光染色鑒定分化細胞.通過Western blot法檢測不同FBS濃度的分化條件下MAP-2與GFAP的錶達情況.結果 穫得大量未分化且懸浮生長的NSCs毬,併能分化為神經元和神經膠質細胞.隨著血清濃度的增加,各組MAP-2的錶達逐漸增加(P＜0.05),GFAP的錶達逐漸減少(P＜0.05).結論 應用無血清培養技術可成功在體外培養齣具有增殖、自我更新及多潛能分化能力的新生大鼠NSCs,可于含有不同FBS濃度(2％、5％、10％)的分化條件下進一步分化為神經元及神經膠質細胞,含低濃度血清的條件培養基促進NSCs嚮神經元方嚮分化,而高濃度血清則有利于NSCs嚮神經膠質細胞方嚮分化.
목적 건립신생SD대서신경간세포(NSCs)적분리배양、체외분화、감정급체외장기배양적방법,병탐토혈청농도대NSCs분화적영향.방법 취신생SD대서대뇌조직,용무혈청배양기술배양NSCs.채용면역형광기술대NSCs진행감정,검측기소단백(Nestin)표체.용함유불동태우혈청(FBS)농도(2％、5％、10％)적DMEM/F-12배양기유도NSCs분화,분별용신경원특이성미관상관단백2(MAP-2)항체、신경효질세포특이성효질섬유산성단백(GFAP)항체행면역형광염색감정분화세포.통과Western blot법검측불동FBS농도적분화조건하MAP-2여GFAP적표체정황.결과 획득대량미분화차현부생장적NSCs구,병능분화위신경원화신경효질세포.수착혈청농도적증가,각조MAP-2적표체축점증가(P＜0.05),GFAP적표체축점감소(P＜0.05).결론 응용무혈청배양기술가성공재체외배양출구유증식、자아경신급다잠능분화능력적신생대서NSCs,가우함유불동FBS농도(2％、5％、10％)적분화조건하진일보분화위신경원급신경효질세포,함저농도혈청적조건배양기촉진NSCs향신경원방향분화,이고농도혈청칙유리우NSCs향신경효질세포방향분화.
