湖北中医药大学学报
湖北中醫藥大學學報
호북중의약대학학보
JOURNAL OF HUBEI UNIVERSITY OF CHINESE MEDICINE
2013年
6期
20-24
,共5页
周庆%罗智%赵东赤%马磊%魏来%李蕾
週慶%囉智%趙東赤%馬磊%魏來%李蕾
주경%라지%조동적%마뢰%위래%리뢰
呼吸道合胞病毒%信使核糖核酸差异显示法%表达序列标签%小干扰核糖核酸%噻唑蓝比色法
呼吸道閤胞病毒%信使覈糖覈痠差異顯示法%錶達序列標籤%小榦擾覈糖覈痠%噻唑藍比色法
호흡도합포병독%신사핵당핵산차이현시법%표체서렬표첨%소간우핵당핵산%새서람비색법
RSV%DDPT-PCR%EST%siRNA%MTT
目的 为了筛选潜在的抗呼吸道合胞病毒药物作用靶标,以呼吸道合胞病毒感染相关的基因为靶标来构建抑制RSV感染的pSUPER RNAi表达载体,通过体外抗病毒实验进行验证,最后筛选出有效的靶基因.方法 利用信使RNA (mRNA)差异显示法,获得特定细胞差异表达的mRNA差异显示谱,通过电子克隆获得这些EST片段的电子延伸产物,得到三十余条与RSV感染密切相关的基因.从中选取部分基因序列作为靶点,化学合成2条编码短发夹RNA序列的寡核苷酸链克隆到pSUPER载体上,构建若干靶向呼吸道合胞病毒感染细胞的相关基因的RNAi质粒.通过体外抗病毒实验来筛选有效的作用靶标结果.结果 本研究设计的siRNA序列克隆到了pSUPER上相应位置,序列正确.针对RSV基因构建的重组质粒pshRNA-ZQ06/16/20/26均可减轻RSV所致的细胞病变,降低病毒滴度,重组质粒对细胞生长无明显细胞毒性作用,通过噻唑蓝比色法(MTT)从mRNA水平分析并确定了该RNAi效应对靶基因有特异性抑制作用.结论 重组质粒pshRNA-ZQ06/20/26较pshRNA-ZQ16抗RSV作用要强.
目的 為瞭篩選潛在的抗呼吸道閤胞病毒藥物作用靶標,以呼吸道閤胞病毒感染相關的基因為靶標來構建抑製RSV感染的pSUPER RNAi錶達載體,通過體外抗病毒實驗進行驗證,最後篩選齣有效的靶基因.方法 利用信使RNA (mRNA)差異顯示法,穫得特定細胞差異錶達的mRNA差異顯示譜,通過電子剋隆穫得這些EST片段的電子延伸產物,得到三十餘條與RSV感染密切相關的基因.從中選取部分基因序列作為靶點,化學閤成2條編碼短髮夾RNA序列的寡覈苷痠鏈剋隆到pSUPER載體上,構建若榦靶嚮呼吸道閤胞病毒感染細胞的相關基因的RNAi質粒.通過體外抗病毒實驗來篩選有效的作用靶標結果.結果 本研究設計的siRNA序列剋隆到瞭pSUPER上相應位置,序列正確.針對RSV基因構建的重組質粒pshRNA-ZQ06/16/20/26均可減輕RSV所緻的細胞病變,降低病毒滴度,重組質粒對細胞生長無明顯細胞毒性作用,通過噻唑藍比色法(MTT)從mRNA水平分析併確定瞭該RNAi效應對靶基因有特異性抑製作用.結論 重組質粒pshRNA-ZQ06/20/26較pshRNA-ZQ16抗RSV作用要彊.
목적 위료사선잠재적항호흡도합포병독약물작용파표,이호흡도합포병독감염상관적기인위파표래구건억제RSV감염적pSUPER RNAi표체재체,통과체외항병독실험진행험증,최후사선출유효적파기인.방법 이용신사RNA (mRNA)차이현시법,획득특정세포차이표체적mRNA차이현시보,통과전자극륭획득저사EST편단적전자연신산물,득도삼십여조여RSV감염밀절상관적기인.종중선취부분기인서렬작위파점,화학합성2조편마단발협RNA서렬적과핵감산련극륭도pSUPER재체상,구건약간파향호흡도합포병독감염세포적상관기인적RNAi질립.통과체외항병독실험래사선유효적작용파표결과.결과 본연구설계적siRNA서렬극륭도료pSUPER상상응위치,서렬정학.침대RSV기인구건적중조질립pshRNA-ZQ06/16/20/26균가감경RSV소치적세포병변,강저병독적도,중조질립대세포생장무명현세포독성작용,통과새서람비색법(MTT)종mRNA수평분석병학정료해RNAi효응대파기인유특이성억제작용.결론 중조질립pshRNA-ZQ06/20/26교pshRNA-ZQ16항RSV작용요강.
