食品与生物技术学报
食品與生物技術學報
식품여생물기술학보
JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY
2013年
12期
1319-1326
,共8页
谢珍茗%方丽莎%孙明%余林
謝珍茗%方麗莎%孫明%餘林
사진명%방려사%손명%여림
葡聚糖%拟糖蛋白抗原%制备%抗体%酶联免疫分析
葡聚糖%擬糖蛋白抗原%製備%抗體%酶聯免疫分析
포취당%의당단백항원%제비%항체%매련면역분석
dextran%neoglycoprotein antigen%preparation%antibody%ELISA
制备并筛选葡聚糖拟糖蛋白抗原,通过动物免疫获得葡聚糖多克隆抗体并建立葡聚糖的Elisa检测方法,应用于实际样品检测.以还原胺化法制备大分子葡聚糖-牛血清蛋白(BSA)拟糖蛋白质,通过SDS-PAGE与自由氨基测定,优化葡聚糖拟糖蛋白抗原制备反应,建立直接竞争Elisa筛选抗原活性.以制得的葡聚糖T40-BSA拟糖蛋白抗原为免疫原,经过免疫白兔后获得高效价多抗;建立检测葡聚糖多抗的间接非竞争Elisa方法.确定拟糖蛋白抗原的最佳制备条件(n(葡聚糖)/n(氧化剂NaIO4)=1/120,偶联时间24 h);筛选获得不同制备条件下与标准抗体结合最强的抗原产物T40-BSA,动物免疫获得多抗,优化实验条件:以质量浓度10 μg/mL的T40-BSA为包被抗原,37℃时血清多抗和酶标多抗的反应时间均为45 min,质量分数5％小牛血清为封闭液后洗板;建立了基于T40-BSA拟糖蛋白抗原的不同相对分子质量葡聚糖间接竞争Elisa检测方法,并应用于对市售白糖中葡聚糖T40的含量检测.研究结果表明,葡聚糖-BSA拟糖蛋白抗原制备条件不同,对其免疫活性有影响.建立的检测方法有良好的线性,能用于实际样品中葡聚糖含量的检测.
製備併篩選葡聚糖擬糖蛋白抗原,通過動物免疫穫得葡聚糖多剋隆抗體併建立葡聚糖的Elisa檢測方法,應用于實際樣品檢測.以還原胺化法製備大分子葡聚糖-牛血清蛋白(BSA)擬糖蛋白質,通過SDS-PAGE與自由氨基測定,優化葡聚糖擬糖蛋白抗原製備反應,建立直接競爭Elisa篩選抗原活性.以製得的葡聚糖T40-BSA擬糖蛋白抗原為免疫原,經過免疫白兔後穫得高效價多抗;建立檢測葡聚糖多抗的間接非競爭Elisa方法.確定擬糖蛋白抗原的最佳製備條件(n(葡聚糖)/n(氧化劑NaIO4)=1/120,偶聯時間24 h);篩選穫得不同製備條件下與標準抗體結閤最彊的抗原產物T40-BSA,動物免疫穫得多抗,優化實驗條件:以質量濃度10 μg/mL的T40-BSA為包被抗原,37℃時血清多抗和酶標多抗的反應時間均為45 min,質量分數5％小牛血清為封閉液後洗闆;建立瞭基于T40-BSA擬糖蛋白抗原的不同相對分子質量葡聚糖間接競爭Elisa檢測方法,併應用于對市售白糖中葡聚糖T40的含量檢測.研究結果錶明,葡聚糖-BSA擬糖蛋白抗原製備條件不同,對其免疫活性有影響.建立的檢測方法有良好的線性,能用于實際樣品中葡聚糖含量的檢測.
제비병사선포취당의당단백항원,통과동물면역획득포취당다극륭항체병건립포취당적Elisa검측방법,응용우실제양품검측.이환원알화법제비대분자포취당-우혈청단백(BSA)의당단백질,통과SDS-PAGE여자유안기측정,우화포취당의당단백항원제비반응,건립직접경쟁Elisa사선항원활성.이제득적포취당T40-BSA의당단백항원위면역원,경과면역백토후획득고효개다항;건립검측포취당다항적간접비경쟁Elisa방법.학정의당단백항원적최가제비조건(n(포취당)/n(양화제NaIO4)=1/120,우련시간24 h);사선획득불동제비조건하여표준항체결합최강적항원산물T40-BSA,동물면역획득다항,우화실험조건:이질량농도10 μg/mL적T40-BSA위포피항원,37℃시혈청다항화매표다항적반응시간균위45 min,질량분수5％소우혈청위봉폐액후세판;건립료기우T40-BSA의당단백항원적불동상대분자질량포취당간접경쟁Elisa검측방법,병응용우대시수백당중포취당T40적함량검측.연구결과표명,포취당-BSA의당단백항원제비조건불동,대기면역활성유영향.건립적검측방법유량호적선성,능용우실제양품중포취당함량적검측.
