中国医学科学院学报
中國醫學科學院學報
중국의학과학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE
2013年
6期
595-600
,共6页
付俊%宗书东%缪时英%宋伟
付俊%宗書東%繆時英%宋偉
부준%종서동%무시영%송위
肌动蛋白样蛋白7a%表达%纯化%主动免疫%抗精子抗体
肌動蛋白樣蛋白7a%錶達%純化%主動免疫%抗精子抗體
기동단백양단백7a%표체%순화%주동면역%항정자항체
目的 原核表达并纯化全长的人精子肌动蛋白样蛋白7a(ACTL7a)蛋白,检测主动免疫ACTL7a产生抗精子抗体后小鼠睾丸的损伤情况.方法 构建重组表达质粒pET30a-ACTL7a,以重组质粒转化E.coli Rosseta(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的 蛋白表达,通过镍离子金属螯合树脂纯化和SDS-PAGE切胶分离目的 蛋白,溶胶后以表达的ACTL7a蛋白免疫ICR小鼠.ELISA检测抗体效价,PAS染色检测主动免疫后曲细精管的发育.结果 经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达出目的 蛋白ACTL7a,纯化后免疫ICR小鼠,经PAS染色发现主动免疫ACTL7a的小鼠其睾丸曲细精管出现生精细胞脱落、核凝聚、生精细胞缺如、生精细胞退化等异常的管腔.结论 成功构建了ACTL7a基因全长的原核表达载体,经诱导表达和纯化获得高纯度的目的 蛋白.发现ACTL7a蛋白主动免疫ICR小鼠产生抗精子抗体后,小鼠睾丸的曲细精管发生严重损伤.
目的 原覈錶達併純化全長的人精子肌動蛋白樣蛋白7a(ACTL7a)蛋白,檢測主動免疫ACTL7a產生抗精子抗體後小鼠睪汍的損傷情況.方法 構建重組錶達質粒pET30a-ACTL7a,以重組質粒轉化E.coli Rosseta(DE3),異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導目的 蛋白錶達,通過鎳離子金屬螯閤樹脂純化和SDS-PAGE切膠分離目的 蛋白,溶膠後以錶達的ACTL7a蛋白免疫ICR小鼠.ELISA檢測抗體效價,PAS染色檢測主動免疫後麯細精管的髮育.結果 經IPTG誘導,在大腸桿菌中錶達齣目的 蛋白ACTL7a,純化後免疫ICR小鼠,經PAS染色髮現主動免疫ACTL7a的小鼠其睪汍麯細精管齣現生精細胞脫落、覈凝聚、生精細胞缺如、生精細胞退化等異常的管腔.結論 成功構建瞭ACTL7a基因全長的原覈錶達載體,經誘導錶達和純化穫得高純度的目的 蛋白.髮現ACTL7a蛋白主動免疫ICR小鼠產生抗精子抗體後,小鼠睪汍的麯細精管髮生嚴重損傷.
목적 원핵표체병순화전장적인정자기동단백양단백7a(ACTL7a)단백,검측주동면역ACTL7a산생항정자항체후소서고환적손상정황.방법 구건중조표체질립pET30a-ACTL7a,이중조질립전화E.coli Rosseta(DE3),이병기류대반유당감(IPTG)유도목적 단백표체,통과얼리자금속오합수지순화화SDS-PAGE절효분리목적 단백,용효후이표체적ACTL7a단백면역ICR소서.ELISA검측항체효개,PAS염색검측주동면역후곡세정관적발육.결과 경IPTG유도,재대장간균중표체출목적 단백ACTL7a,순화후면역ICR소서,경PAS염색발현주동면역ACTL7a적소서기고환곡세정관출현생정세포탈락、핵응취、생정세포결여、생정세포퇴화등이상적관강.결론 성공구건료ACTL7a기인전장적원핵표체재체,경유도표체화순화획득고순도적목적 단백.발현ACTL7a단백주동면역ICR소서산생항정자항체후,소서고환적곡세정관발생엄중손상.
