现代肿瘤医学
現代腫瘤醫學
현대종류의학
JOURNAL OF MODERN ONCOLOGY
2014年
1期
29-33
,共5页
江冠民%谢婉莹%张坤水%邱瑜%张秋桂%杜军
江冠民%謝婉瑩%張坤水%邱瑜%張鞦桂%杜軍
강관민%사완형%장곤수%구유%장추계%두군
成纤维细胞激活蛋白%多克隆抗体%肿瘤转移%肿瘤间质
成纖維細胞激活蛋白%多剋隆抗體%腫瘤轉移%腫瘤間質
성섬유세포격활단백%다극륭항체%종류전이%종류간질
目的:表达和纯化小鼠成纤维细胞激活蛋白α(FAPα)二肽基肽酶催化核心序列(FAPαc)融合蛋白(His-FAPαc),制备兔抗小鼠FAPα多克隆抗体,并用此抗体检测FAPα在肿瘤细胞和成纤维细胞以及肿瘤间质中的表达情况.方法:将本实验室构建好的原核表达质粒pET28a(+)-FAPαc转化大肠杆菌BL21,IPTG 诱导表达目的蛋白His-FAPαc;用纯化的目的蛋白免疫新西兰大白兔,获得兔抗小鼠FAPα多克隆抗体;用免疫印迹法和酶联免疫吸附试验检测该多克隆抗体与重组蛋白His-FAPαc 的反应性及检测该多克隆抗体的效价,并用该抗体检测FAPα在肿瘤细胞和成纤维细胞以及肿瘤间质中的表达情况.结果:His-FAPαc融合蛋白可与兔抗小鼠FAPα多克隆抗体特异性结合;该多克隆抗体的效价高,特异性好,并且能检测小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryo fibroblast cells;MEF)及结肠癌和乳腺癌的间质细胞高表达FAPα的全长序列蛋白.结论:制备的兔抗小鼠FAPα多克隆抗体能够有效地识别小鼠胚胎成纤维细胞和肿瘤间质细胞表达的FAPα蛋白,为研究FAPα在肿瘤的发生、发展及转移中的作用和以FAPα为靶点而开展的的抗肿瘤研究奠定基础.
目的:錶達和純化小鼠成纖維細胞激活蛋白α(FAPα)二肽基肽酶催化覈心序列(FAPαc)融閤蛋白(His-FAPαc),製備兔抗小鼠FAPα多剋隆抗體,併用此抗體檢測FAPα在腫瘤細胞和成纖維細胞以及腫瘤間質中的錶達情況.方法:將本實驗室構建好的原覈錶達質粒pET28a(+)-FAPαc轉化大腸桿菌BL21,IPTG 誘導錶達目的蛋白His-FAPαc;用純化的目的蛋白免疫新西蘭大白兔,穫得兔抗小鼠FAPα多剋隆抗體;用免疫印跡法和酶聯免疫吸附試驗檢測該多剋隆抗體與重組蛋白His-FAPαc 的反應性及檢測該多剋隆抗體的效價,併用該抗體檢測FAPα在腫瘤細胞和成纖維細胞以及腫瘤間質中的錶達情況.結果:His-FAPαc融閤蛋白可與兔抗小鼠FAPα多剋隆抗體特異性結閤;該多剋隆抗體的效價高,特異性好,併且能檢測小鼠胚胎成纖維細胞(Mouse embryo fibroblast cells;MEF)及結腸癌和乳腺癌的間質細胞高錶達FAPα的全長序列蛋白.結論:製備的兔抗小鼠FAPα多剋隆抗體能夠有效地識彆小鼠胚胎成纖維細胞和腫瘤間質細胞錶達的FAPα蛋白,為研究FAPα在腫瘤的髮生、髮展及轉移中的作用和以FAPα為靶點而開展的的抗腫瘤研究奠定基礎.
목적:표체화순화소서성섬유세포격활단백α(FAPα)이태기태매최화핵심서렬(FAPαc)융합단백(His-FAPαc),제비토항소서FAPα다극륭항체,병용차항체검측FAPα재종류세포화성섬유세포이급종류간질중적표체정황.방법:장본실험실구건호적원핵표체질립pET28a(+)-FAPαc전화대장간균BL21,IPTG 유도표체목적단백His-FAPαc;용순화적목적단백면역신서란대백토,획득토항소서FAPα다극륭항체;용면역인적법화매련면역흡부시험검측해다극륭항체여중조단백His-FAPαc 적반응성급검측해다극륭항체적효개,병용해항체검측FAPα재종류세포화성섬유세포이급종류간질중적표체정황.결과:His-FAPαc융합단백가여토항소서FAPα다극륭항체특이성결합;해다극륭항체적효개고,특이성호,병차능검측소서배태성섬유세포(Mouse embryo fibroblast cells;MEF)급결장암화유선암적간질세포고표체FAPα적전장서렬단백.결론:제비적토항소서FAPα다극륭항체능구유효지식별소서배태성섬유세포화종류간질세포표체적FAPα단백,위연구FAPα재종류적발생、발전급전이중적작용화이FAPα위파점이개전적적항종류연구전정기출.
