郑州大学学报(医学版)
鄭州大學學報(醫學版)
정주대학학보(의학판)
JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERISTY(MEDICAL SCIENCES)
2013年
2期
171-174
,共4页
韩康%石科%毛丽红%李庆华%龚方华%蒋海丽%薛乐勋
韓康%石科%毛麗紅%李慶華%龔方華%蔣海麗%薛樂勛
한강%석과%모려홍%리경화%공방화%장해려%설악훈
杜氏盐藻%鞭毛内运输蛋白88%鞭毛再生
杜氏鹽藻%鞭毛內運輸蛋白88%鞭毛再生
두씨염조%편모내운수단백88%편모재생
目的:克隆杜氏盐藻鞭毛内运输蛋白(IFT)88的cDNA全长并分析其部分功能.方法:根据盐藻转录组测序片段,分别设计其3端内、外侧引物及5端内、外侧引物,PCR扩增其全长.提取盐藻再生过程中不同时间段的总RNA,逆转录后进行实时荧光定量PCR,检测IFT88 mRNA的表达情况.随后利用ORF finder预测并扩增其开放阅读框,连接到pET28a载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),并在1 mmol/L IPTG、37 ℃的条件下诱导4 h,提取总蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测IFT88蛋白表达情况.结果:克隆拼接后共得到开放阅读框2 400 bp,编码799个氨基酸.BLAST显示该氨基酸序列与多个物种的IFT88有较高同源性.SDS-PAGE结果显示,与未诱导组相比,诱导组在90 000左右有一条明显的条带.在鞭毛再生过程中,杜氏盐藻IFT88 mRNA的表达量在去鞭毛后30 min左右时最高,随后快速下降.结论:扩增得到杜氏盐藻IFT88 cDNA序列且IFT88可能参与盐藻鞭毛组装.
目的:剋隆杜氏鹽藻鞭毛內運輸蛋白(IFT)88的cDNA全長併分析其部分功能.方法:根據鹽藻轉錄組測序片段,分彆設計其3耑內、外側引物及5耑內、外側引物,PCR擴增其全長.提取鹽藻再生過程中不同時間段的總RNA,逆轉錄後進行實時熒光定量PCR,檢測IFT88 mRNA的錶達情況.隨後利用ORF finder預測併擴增其開放閱讀框,連接到pET28a載體上,轉化大腸桿菌BL21(DE3),併在1 mmol/L IPTG、37 ℃的條件下誘導4 h,提取總蛋白,聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)檢測IFT88蛋白錶達情況.結果:剋隆拼接後共得到開放閱讀框2 400 bp,編碼799箇氨基痠.BLAST顯示該氨基痠序列與多箇物種的IFT88有較高同源性.SDS-PAGE結果顯示,與未誘導組相比,誘導組在90 000左右有一條明顯的條帶.在鞭毛再生過程中,杜氏鹽藻IFT88 mRNA的錶達量在去鞭毛後30 min左右時最高,隨後快速下降.結論:擴增得到杜氏鹽藻IFT88 cDNA序列且IFT88可能參與鹽藻鞭毛組裝.
목적:극륭두씨염조편모내운수단백(IFT)88적cDNA전장병분석기부분공능.방법:근거염조전록조측서편단,분별설계기3단내、외측인물급5단내、외측인물,PCR확증기전장.제취염조재생과정중불동시간단적총RNA,역전록후진행실시형광정량PCR,검측IFT88 mRNA적표체정황.수후이용ORF finder예측병확증기개방열독광,련접도pET28a재체상,전화대장간균BL21(DE3),병재1 mmol/L IPTG、37 ℃적조건하유도4 h,제취총단백,취병희선알응효전영(SDS-PAGE)검측IFT88단백표체정황.결과:극륭병접후공득도개방열독광2 400 bp,편마799개안기산.BLAST현시해안기산서렬여다개물충적IFT88유교고동원성.SDS-PAGE결과현시,여미유도조상비,유도조재90 000좌우유일조명현적조대.재편모재생과정중,두씨염조IFT88 mRNA적표체량재거편모후30 min좌우시최고,수후쾌속하강.결론:확증득도두씨염조IFT88 cDNA서렬차IFT88가능삼여염조편모조장.
