CAJ | 학술논문

目的探讨利用液氮储存的椎间盘与表达人BMP7的髓核细胞体外构建生物活性椎间盘器官的可行性.方法取液氮储存2个月的犬椎间盘48个,分为EGFP对照组、1×104、1×105和1×106共四组,每组12个椎间盘.对照组用22 G注射器自椎间盘后正中注入20 μL 含有1×105表达EGFP的髓核细胞,1×104组注入20 μL含有1×104 PKH-26标记的表达hBMP7的髓核细胞,1×105组注入20 μL含1×106KH-26标记的表达hBMP7的髓核细胞,1×106组注入20 μL含1×105KH-26标记的表达hBMP7的髓核细胞.注射后立即置入50 mL离心管中,加入30 mL完全培养基,分别于培养第4、7、14 d,从外源细胞存活、存活细胞量、hBMP7的表达、蛋白多糖及总胶原含量变化对体外构建的生物活性椎间盘进行评价.结果在椎间盘培养的各时间点均可见PKH-26红色荧光和表达绿色荧光蛋白的髓核细胞存在.对不同组、不同时间点的椎间盘中荧光强度定量后发现:培养第7天、14天时1×105组荧光强度明显高于1×106组和1×104组(P<0.05).1×105组在第7、14天时hBMP7 mRNA表达量明显高于1×106组和1×104组(P<0.05),EGFP组未见表达;且1×105组在培养的第7天、14天时蛋白多糖及总胶原含量均较另外三组明显增高(P<0.05).结论应用液氮冻存的椎间盘与1×105个表达hBMP7的髓核细胞复合,外源性髓核细胞可较长时间存活,并能增加蛋白多糖及胶原含量,是一种体外构建生物活性椎间盘的可行性方法.
목적 탐토이용액담저존적추간반여표체인BMP7적수핵세포체외구건생물활성추간반기관적가행성.방법 취액담저존2개월적견추간반48개,분위EGFP대조조、1×104、1×105화1×106공사조,매조12개추간반.대조조용22 G주사기자추간반후정중주입20 μL 함유1×105표체EGFP적수핵세포,1×104조주입20 μL함유1×104 PKH-26표기적표체hBMP7적수핵세포,1×105조주입20 μL함1×106KH-26표기적표체hBMP7적수핵세포,1×106조주입20 μL함1×105KH-26표기적표체hBMP7적수핵세포.주사후립즉치입50 mL리심관중,가입30 mL완전배양기,분별우배양제4、7、14 d,종외원세포존활、존활세포량、hBMP7적표체、단백다당급총효원함량변화대체외구건적생물활성추간반진행평개.결과 재추간반배양적각시간점균가견PKH-26홍색형광화표체록색형광단백적수핵세포존재.대불동조、불동시간점적추간반중형광강도정량후발현:배양제7천、14천시1×105조형광강도명현고우1×106조화1×104조(P<0.05).1×105조재제7、14천시hBMP7 mRNA표체량명현고우1×106조화1×104조(P<0.05),EGFP조미견표체;차1×105조재배양적제7천、14천시단백다당급총효원함량균교령외삼조명현증고(P<0.05).결론 응용액담동존적추간반여1×105개표체hBMP7적수핵세포복합,외원성수핵세포가교장시간존활,병능증가단백다당급효원함량,시일충체외구건생물활성추간반적가행성방법.