中国药理学通报
中國藥理學通報
중국약이학통보
CHINESE PHARMACOLOGICAL BULLETIN
2013年
4期
553-556
,共4页
张富东%高丽辉%冯国华%牛艳芬%刘旭%李玲
張富東%高麗輝%馮國華%牛豔芬%劉旭%李玲
장부동%고려휘%풍국화%우염분%류욱%리령
芒果苷%根皮苷%糖尿病%SGLT1%SGLT2%转染%Western%blot
芒果苷%根皮苷%糖尿病%SGLT1%SGLT2%轉染%Western%blot
망과감%근피감%당뇨병%SGLT1%SGLT2%전염%Western%blot
目的 将hSGLT1和hSGLT2基因分别转染入CHO-K1细胞,以根皮苷为阳性对照,研究芒果苷对hSGLT1-CHO-K1和hSGLT2-CHO-K1中hSGLT1及hSGLT2蛋白表达的影响.方法 ①脂质体介导重组hSGLT1基因和hSGLT2基因转染CHO-K1细胞,将hSGLT1和hSGLT2的编码区cDNA与真核表达载体pReceiver-M03相连接后,转染入CHO-K1细胞中,以倒置荧光显微镜观测绿色荧光发光位置.同时,以抗生素G418对转染细胞进行7 d压力筛选和96孔板单克隆,以得到稳定转染细胞系.②用Western blot探讨不同浓度芒果苷和根皮苷对hSGLT1及hSGLT2蛋白表达的影响,初步分析其作用机制.结果① 脂质体介导重组hSGLT1基因和hSGLT2基因转染CHO-K1细胞48 h后,细胞表面出现明显的绿色荧光,呈环状,转让率达60%~70%,Western blot结果提示转染细胞有明显的SGLT1和SGLT2蛋白表达.②芒果苷与hSGLT1-CHO-K1和hSGLT2-CHO-K1分别作用48 h后,经Western blot检测显示,芒果苷组的hSGLT1/β-actin和hSGLT2/β-actin灰度比值均低于正常组,且具有浓度依赖性,与未处理组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);与等分子的根皮苷组相比,差异无统计学意义.结论 ①建立了稳定转染的hSGLT1-CHO-K1和hSGLT2-CHO-K1细胞系.② 芒果苷能下调hSGLT1-CHO-K1和hSGLT2-CHO-K1细胞SGLT1和SGLT2蛋白的表达量,其效价与根皮苷相当.
目的 將hSGLT1和hSGLT2基因分彆轉染入CHO-K1細胞,以根皮苷為暘性對照,研究芒果苷對hSGLT1-CHO-K1和hSGLT2-CHO-K1中hSGLT1及hSGLT2蛋白錶達的影響.方法 ①脂質體介導重組hSGLT1基因和hSGLT2基因轉染CHO-K1細胞,將hSGLT1和hSGLT2的編碼區cDNA與真覈錶達載體pReceiver-M03相連接後,轉染入CHO-K1細胞中,以倒置熒光顯微鏡觀測綠色熒光髮光位置.同時,以抗生素G418對轉染細胞進行7 d壓力篩選和96孔闆單剋隆,以得到穩定轉染細胞繫.②用Western blot探討不同濃度芒果苷和根皮苷對hSGLT1及hSGLT2蛋白錶達的影響,初步分析其作用機製.結果① 脂質體介導重組hSGLT1基因和hSGLT2基因轉染CHO-K1細胞48 h後,細胞錶麵齣現明顯的綠色熒光,呈環狀,轉讓率達60%~70%,Western blot結果提示轉染細胞有明顯的SGLT1和SGLT2蛋白錶達.②芒果苷與hSGLT1-CHO-K1和hSGLT2-CHO-K1分彆作用48 h後,經Western blot檢測顯示,芒果苷組的hSGLT1/β-actin和hSGLT2/β-actin灰度比值均低于正常組,且具有濃度依賴性,與未處理組相比,差異具有統計學意義(P<0.05);與等分子的根皮苷組相比,差異無統計學意義.結論 ①建立瞭穩定轉染的hSGLT1-CHO-K1和hSGLT2-CHO-K1細胞繫.② 芒果苷能下調hSGLT1-CHO-K1和hSGLT2-CHO-K1細胞SGLT1和SGLT2蛋白的錶達量,其效價與根皮苷相噹.
목적 장hSGLT1화hSGLT2기인분별전염입CHO-K1세포,이근피감위양성대조,연구망과감대hSGLT1-CHO-K1화hSGLT2-CHO-K1중hSGLT1급hSGLT2단백표체적영향.방법 ①지질체개도중조hSGLT1기인화hSGLT2기인전염CHO-K1세포,장hSGLT1화hSGLT2적편마구cDNA여진핵표체재체pReceiver-M03상련접후,전염입CHO-K1세포중,이도치형광현미경관측록색형광발광위치.동시,이항생소G418대전염세포진행7 d압력사선화96공판단극륭,이득도은정전염세포계.②용Western blot탐토불동농도망과감화근피감대hSGLT1급hSGLT2단백표체적영향,초보분석기작용궤제.결과① 지질체개도중조hSGLT1기인화hSGLT2기인전염CHO-K1세포48 h후,세포표면출현명현적록색형광,정배상,전양솔체60%~70%,Western blot결과제시전염세포유명현적SGLT1화SGLT2단백표체.②망과감여hSGLT1-CHO-K1화hSGLT2-CHO-K1분별작용48 h후,경Western blot검측현시,망과감조적hSGLT1/β-actin화hSGLT2/β-actin회도비치균저우정상조,차구유농도의뢰성,여미처리조상비,차이구유통계학의의(P<0.05);여등분자적근피감조상비,차이무통계학의의.결론 ①건립료은정전염적hSGLT1-CHO-K1화hSGLT2-CHO-K1세포계.② 망과감능하조hSGLT1-CHO-K1화hSGLT2-CHO-K1세포SGLT1화SGLT2단백적표체량,기효개여근피감상당.
