医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2013年
1期
10-15
,共6页
王帅%魏钦俊%范燚%鲁雅洁%邢光前%曹新
王帥%魏欽俊%範燚%魯雅潔%邢光前%曹新
왕수%위흠준%범일%로아길%형광전%조신
耳聋%GJB3基因%突变%致病性
耳聾%GJB3基因%突變%緻病性
이롱%GJB3기인%돌변%치병성
目的 对人GJB3基因c.538C>T点突变进行生物信息学及功能分析,预测并验证其致病性.方法 聚合酶链反应扩增含GJB3基因c.538C>T突变的编码区全序列,DNA测序验证后与T载体连接,再通过重组DNA技术,将GJB3基因编码区全序列导入pEGFP-N1载体,构建了GJB3基因野生型(pEGFP-Cx31-WT)和突变型(pEGFP-Cx31-R180X)表达载体,验证并纯化后,分别转染人胚肾HEK293细胞,观察EGFP-Cx31融合蛋白在细胞内定位表达情况.通过生物信息学方法分析c.538C>T突变前后,Cx31蛋白的三维空间结构和平均势能变化.结果 细胞内荧光定位结果显示GJB3c.538C>T突变后,Cx31蛋白只于胞内表达,未能正常形成细胞间隙连接结构.而生物信息学分析结果也表明突变后Cx31蛋白的三维空间结构和Anolea原子平均势能均发生了明显变化.结论 GJB3基因c.538C>T点突变导致其编码的Cx31蛋白的结构与功能发生变化,可能通过影响细胞间隙连接的形成,从而导致遗传性耳聋的发生.
目的 對人GJB3基因c.538C>T點突變進行生物信息學及功能分析,預測併驗證其緻病性.方法 聚閤酶鏈反應擴增含GJB3基因c.538C>T突變的編碼區全序列,DNA測序驗證後與T載體連接,再通過重組DNA技術,將GJB3基因編碼區全序列導入pEGFP-N1載體,構建瞭GJB3基因野生型(pEGFP-Cx31-WT)和突變型(pEGFP-Cx31-R180X)錶達載體,驗證併純化後,分彆轉染人胚腎HEK293細胞,觀察EGFP-Cx31融閤蛋白在細胞內定位錶達情況.通過生物信息學方法分析c.538C>T突變前後,Cx31蛋白的三維空間結構和平均勢能變化.結果 細胞內熒光定位結果顯示GJB3c.538C>T突變後,Cx31蛋白隻于胞內錶達,未能正常形成細胞間隙連接結構.而生物信息學分析結果也錶明突變後Cx31蛋白的三維空間結構和Anolea原子平均勢能均髮生瞭明顯變化.結論 GJB3基因c.538C>T點突變導緻其編碼的Cx31蛋白的結構與功能髮生變化,可能通過影響細胞間隙連接的形成,從而導緻遺傳性耳聾的髮生.
목적 대인GJB3기인c.538C>T점돌변진행생물신식학급공능분석,예측병험증기치병성.방법 취합매련반응확증함GJB3기인c.538C>T돌변적편마구전서렬,DNA측서험증후여T재체련접,재통과중조DNA기술,장GJB3기인편마구전서렬도입pEGFP-N1재체,구건료GJB3기인야생형(pEGFP-Cx31-WT)화돌변형(pEGFP-Cx31-R180X)표체재체,험증병순화후,분별전염인배신HEK293세포,관찰EGFP-Cx31융합단백재세포내정위표체정황.통과생물신식학방법분석c.538C>T돌변전후,Cx31단백적삼유공간결구화평균세능변화.결과 세포내형광정위결과현시GJB3c.538C>T돌변후,Cx31단백지우포내표체,미능정상형성세포간극련접결구.이생물신식학분석결과야표명돌변후Cx31단백적삼유공간결구화Anolea원자평균세능균발생료명현변화.결론 GJB3기인c.538C>T점돌변도치기편마적Cx31단백적결구여공능발생변화,가능통과영향세포간극련접적형성,종이도치유전성이롱적발생.
