CAJ | 학술논문

目的应用自制的大肠癌相关蛋白SCAP47作为抗原制备兔多抗血清和鼠单克隆抗体,测定效价,鉴定特性,为相关抗体的临床应用提供可行性依据.方法 ①制备兔多抗血清:实验动物为纯种新西兰白兔,卡介苗基础免疫后,分次多点注射抗原,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和双向凝胶扩散法测血清效价,分离高效价血清.②制备小鼠单克隆抗体:实验动物为BALB/c小鼠,分次腹腔、脾内注射抗原蛋白乳剂和水剂,采用ELISA测血清效价,高效价鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合,有限稀释法亚克隆阳性细胞株,克隆细胞种植小鼠腹腔,收获腹水,纯化单克隆抗体,鉴定抗体效价、亚类、纯度.结果 ①3只实验兔中2只产生了一定效价的多抗血清,多抗血清效价:间接ELISA结果兔1为1∶6400,兔2为1∶1600;琼脂糖双扩试验结果兔1为1∶32,兔2为1∶4.②克隆了2株能产生抗SCAP47抗原的单克隆抗体细胞株抗SCAP47-B1和抗SCAP47-B2,将细胞种植于BALB/c小鼠腹腔,成功诱导小鼠腹水生成,以50、22 kD为主要蛋白,Western blot试验证实为小鼠IgG,琼脂糖双扩试验显示为小鼠IgG2a亚型;免疫荧光细胞组织化学试验显示,SCAP47蛋白在大肠癌细胞膜表面可表达,正常对照细胞未见表达,大肠癌细胞膜表面表达的SCAP47蛋白可与抗SCAP47-B1细胞株分泌的抗体产生特异性结合反应;纯化的单克隆抗体效价:SCAP47-B1为1∶1600,SCAP47-B2则达到1∶6400.结论通过杂交瘤单克隆抗体技术制备和纯化的抗SCAP47单克隆抗体,经效价检测和性质鉴定,证明初步达到了免疫试验的要求,为进一步的临床应用提供了可行性依据.
목적 응용자제적대장암상관단백SCAP47작위항원제비토다항혈청화서단극륭항체,측정효개,감정특성,위상관항체적림상응용제공가행성의거.방법 ①제비토다항혈청:실험동물위순충신서란백토,잡개묘기출면역후,분차다점주사항원,채용매련면역흡부시험(ELISA)화쌍향응효확산법측혈청효개,분리고효개혈청.②제비소서단극륭항체:실험동물위BALB/c소서,분차복강、비내주사항원단백유제화수제,채용ELISA측혈청효개,고효개서비세포여골수류SP2/0세포융합,유한희석법아극륭양성세포주,극륭세포충식소서복강,수획복수,순화단극륭항체,감정항체효개、아류、순도.결과 ①3지실험토중2지산생료일정효개적다항혈청,다항혈청효개:간접ELISA결과토1위1∶6400,토2위1∶1600;경지당쌍확시험결과토1위1∶32,토2위1∶4.②극륭료2주능산생항SCAP47항원적단극륭항체세포주항SCAP47-B1화항SCAP47-B2,장세포충식우BALB/c소서복강,성공유도소서복수생성,이50、22 kD위주요단백,Western blot시험증실위소서IgG,경지당쌍확시험현시위소서IgG2a아형;면역형광세포조직화학시험현시,SCAP47단백재대장암세포막표면가표체,정상대조세포미견표체,대장암세포막표면표체적SCAP47단백가여항SCAP47-B1세포주분비적항체산생특이성결합반응;순화적단극륭항체효개:SCAP47-B1위1∶1600,SCAP47-B2칙체도1∶6400.결론 통과잡교류단극륭항체기술제비화순화적항SCAP47단극륭항체,경효개검측화성질감정,증명초보체도료면역시험적요구,위진일보적림상응용제공료가행성의거.