江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
1期
184-188
,共5页
徐重新%陈莎莎%张霄%刘媛%张存政%黄鹰%刘贤进
徐重新%陳莎莎%張霄%劉媛%張存政%黃鷹%劉賢進
서중신%진사사%장소%류원%장존정%황응%류현진
苏云金芽孢杆菌%时间分辨免疫分析%单链抗体%多克隆抗体
囌雲金芽孢桿菌%時間分辨免疫分析%單鏈抗體%多剋隆抗體
소운금아포간균%시간분변면역분석%단련항체%다극륭항체
为了建立检测Cry1B毒素蛋白质的双抗夹心时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)方法,利用稀土元素Eu3+作为示踪剂,以可溶性表达的抗Cry1B毒素蛋白质单链抗体(scFv)作为捕获抗体,以免疫兔血清获得的抗Cry1B毒素蛋白质多克隆抗体为检测抗体,建立检测Cry1B抗原的TRFIA技术,并对其进行方法学的综合评价.通过正交试验,获得的最佳单链抗体(Capture antibody)、多克隆抗体(Detection antibody)、Eu3+标记的二抗(Tracer antibody)浓度分别是2.500μg/ml、2.000 μg/ml、1.000μg/ml.标准检测曲线灵敏度为0.170 ng/ml,线性测量范围为1.000～ 800.000 ng/ml.抗原类似物间无交叉反应.Cry1B毒蛋白质在大米中添加回收的批内变异系数为3.8％～6.6％、平均回收率为80.5％～ 84.8％,批间变异系数为2.2％ ～8.5％、平均回收率为84.1％ ～ 88.4％.表明本试验建立的双抗夹心Cry1B-TRFIA检测范围宽,特异性强,重复性和稳定性好.
為瞭建立檢測Cry1B毒素蛋白質的雙抗夾心時間分辨熒光免疫分析(TRFIA)方法,利用稀土元素Eu3+作為示蹤劑,以可溶性錶達的抗Cry1B毒素蛋白質單鏈抗體(scFv)作為捕穫抗體,以免疫兔血清穫得的抗Cry1B毒素蛋白質多剋隆抗體為檢測抗體,建立檢測Cry1B抗原的TRFIA技術,併對其進行方法學的綜閤評價.通過正交試驗,穫得的最佳單鏈抗體(Capture antibody)、多剋隆抗體(Detection antibody)、Eu3+標記的二抗(Tracer antibody)濃度分彆是2.500μg/ml、2.000 μg/ml、1.000μg/ml.標準檢測麯線靈敏度為0.170 ng/ml,線性測量範圍為1.000～ 800.000 ng/ml.抗原類似物間無交扠反應.Cry1B毒蛋白質在大米中添加迴收的批內變異繫數為3.8％～6.6％、平均迴收率為80.5％～ 84.8％,批間變異繫數為2.2％ ～8.5％、平均迴收率為84.1％ ～ 88.4％.錶明本試驗建立的雙抗夾心Cry1B-TRFIA檢測範圍寬,特異性彊,重複性和穩定性好.
위료건립검측Cry1B독소단백질적쌍항협심시간분변형광면역분석(TRFIA)방법,이용희토원소Eu3+작위시종제,이가용성표체적항Cry1B독소단백질단련항체(scFv)작위포획항체,이면역토혈청획득적항Cry1B독소단백질다극륭항체위검측항체,건립검측Cry1B항원적TRFIA기술,병대기진행방법학적종합평개.통과정교시험,획득적최가단련항체(Capture antibody)、다극륭항체(Detection antibody)、Eu3+표기적이항(Tracer antibody)농도분별시2.500μg/ml、2.000 μg/ml、1.000μg/ml.표준검측곡선령민도위0.170 ng/ml,선성측량범위위1.000～ 800.000 ng/ml.항원유사물간무교차반응.Cry1B독단백질재대미중첨가회수적비내변이계수위3.8％～6.6％、평균회수솔위80.5％～ 84.8％,비간변이계수위2.2％ ～8.5％、평균회수솔위84.1％ ～ 88.4％.표명본시험건립적쌍항협심Cry1B-TRFIA검측범위관,특이성강,중복성화은정성호.
